Pcr

[invitee62926bc]

Bonjour , je révise la pcr mais je ne comprends pas une fois la pcr effectuée et le fragment voulu sélectionné . On en fait quoi? Enzyme de restriction puis migration??? Séquençage???
Merci de votre reponse
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[invite44594c28]

Tout dépends de ce qu'on recherche.

[invite853321bf]

Les 3 sont possibles, oui, comme le dit zimzum18, tout dépend du but de la manip.
Le seul but de la PCR est d'amplifier une séquence spécifique (ou non dans certains cas très particuliers) d'ADN de façon importante, en gros on a assez facilement un facteur de multiplication de l'ordre du million voire plus. Ainsi il est plus facile de travailler par la suite avec un million qu'un seul exemplaire, la réponse que l'on désire sera plus importante et facile à observer.

[invitee62926bc]

Merci de vos réponse
C'est pour une recherche de mutation

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite02e16773]

Merci de vos réponse
C'est pour une recherche de mutation

Et bien tu peux :

* envoyer à séquencer, et regarder si ta mutation est présente, à l'aide de l'information de séquence obtenue.

* choisir un couple d'amorce de telle sorte que tu as un produit uniquement en présence de ta mutation. Ca marchera dans le cas d'une délétion par exemple.
Dans le cas d'une mutation ponctuelle, ça peut se faire par qPCR, mais pas par PCR classique.

* Si ta mutation est associé à un polymorphisme, type RFLP par exemple, tu peux extraire sur gel ton produit de PCR, digérer, et regarder le profil de restriction obtenus.

* ...

C'est quoi, la mutation qui t'intéresse ?