pcr en temps réel

[invitef13ad226]

bonjour,
j'ai quelques questions sur une PCR en temps réel :
-qu'est ce que la notion de CT et comment on la calcule ?
-que détecte une sonde couplée au fluorophore HEX et quel est son rôle?

Merci beaucoup
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[invite853321bf]

- Le Ct (ou Cp ou Cq selon les appareils et les modes) est le cycle à partir duquel la fluorescence émise est significativement différente, et on ne le calcule pas, le thermocycleur le fait très bien pour nous Mais c'est le principe, il faut que la fluorescence soit significativement différente du bruit de fond.

- Une sonde couplée à Hex (ou tout autre fluorophore) détecte l'amplicon auquel elle se lie. Son rôle est de se lier à cet amplicon pour qu'on puisse suivre la création de l'amplicon grâce au fluorophore.

[invitef13ad226]

mais dans mon sujet on me demande d'expliquer comment on calcule un ct?

[invite853321bf]

Alors tu dois avoir une courbe où la fluorescence est au début à zéro. Dans ce cas, le Ct est le cycle où la fluorescence commence à augmenter de façon exponentielle, comme indiqué ici
Cette photo est tirée de ce site http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm qui explique beaucoup de choses sur la PCR Temps Réel.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Edelweiss68]

Concrètement, même si c'est vrai qu'en pratique on ne le calcule pas, le Ct correspond au nombre de cycles au bout duquel on obtient le point maximum de la fonction dérivée de la courbe représentant la fluorescence en fonction du nombre de cycles de PCR. Autrement dit, c'est l'abscisse du point pour lequel le coefficient directeur de l'exponentiel est le plus élevé. Voilà.