Perte de la transformation d'une cellule cancéreuse.

[invitedd898c44]

Bonjour,

Je viens de décongeler une lignée de cellules cancéreuse censée sur-exprimer une protéine donnée. Or, après qPCR, la protéine est normalement exprimée. Il y a un an, cette lignée sur-exprimait bien la protéine mais plus maintenant. J'ai re-testé mon couple d’amorces, ainsi que d'autres paramètres.
Au final, mes cellules ont bien perdu la sur-expression de la dite protéine.

Quelqu'un sait quels phénomènes peuvent amener une cellule à "recracher" un gène, quels phénomènes peuvent faire que ces cellules soient OK sauf au niveau du transgène? (sachant que mes cellules sont bonnes puisqu'il y a un an elles marchaient nikel).

Merci
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[invitec718404f]

Si elle exprime encore elle n'a pas perdu le gène.

Je verrai plutôt du côté de sa viabilité, quelles étaient les conditions de conservation?

[invitedd898c44]

Bonjour, -180°C, azote liquide. Bonne journée

[invitec718404f]

Et c'était une lignée fraîche ou qui a déjà été congelée décongelée plusieurs fois?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitedd898c44]

Techniquement, la lignée a été congelée et décongelée peu de fois (2 à 3 fois maxi). Niveau repiquage j'étais à P6 (6 passages). On ne peut pas parler de lignée "fraîche". Pourquoi le fait de décongeler ou repiquer aurait pu faire perdre l'expression de ma molécule à mes lignées?
Cordialement.

[invitec718404f]

Oui c'est possible que si elle n'est pas très fraîche il y ait un perte de surexpression au profit d'autres protéines "vitales".

[invitedd898c44]

Vous en savez plus sur ce sujet?

[invitec718404f]

Sur de l'eucaryote pas trop, je te conseille de faire de la biblio et de tester des lignées plus fraîches si tu en as.

[invitedd898c44]

oki, merci beaucoup pour ton aide

[invitec718404f]

De rien! J'espère que ça pourra t'aider!