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Extraction acides nucléiques totaux



  1. #1
    Lakisrit

    Extraction acides nucléiques totaux


    ------

    Bonjour, je suis actuellement stagiaire en Master 2 à l'INRA de San Giuliano en Corse. Je travaille sur la mise au point de méthodes qPCR pour la détection de pathogènes chez les agrumes.

    La question que j'ai à poser à la communauté futura science est simple : connaissez-vous une méthodes d'extraction pour les acides nucléiques totaux (extraction ADN + ARN) qui fonctionne chez le végétal ?

    -----

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  3. #2
    Laeti06

    Re : Extraction acides nucléiques totaux

    Bonjour,

    Je ne voudrais pas dire de bêtises mais il ne me semble pas avoir entendu parler d'une méthode permettant d'extraire l'ADN et les ARN en même temps...
    Je sais que Qiagen offre de bons kits permettant l'extraction d'ADN génomique végétal et d'autres kits permettant l'extraction d'ARN.

    En même temps, certains kits préconisent un traitement à la RNAse pour se débarrasser des traces d'ARN lors d'une extraction ADN. Mais les ARN sont-ils suffisamment nombreux dans ce cas ? J'avoue que je n'ai pas encore assez d'expérience.

  4. #3
    kamor

    Re : Extraction acides nucléiques totaux

    En faisant une extraction classique au phénol / chloroforme, on récupère tous les acides nucléiques. Maintenant il y a peut être des étapes spécifiques pour détruire les cellules végétales. Sans trop chahuter les ARN. De plus c'est (très) long et non reproductible.
    Bon courage.

  5. #4
    Lakisrit

    Re : Extraction acides nucléiques totaux

    Merci, je reflechi à la méthode phenol clhoroforme. Tu sais à quel étape sont séparés les ADN de l' ARN ? Est-ce au moment de l'ajout de l'acetate de sodium ?

  6. #5
    kamor

    Re : Extraction acides nucléiques totaux

    http://en.wikipedia.org/wiki/Phenol-...orm_extraction
    Tout y est expliqué. Bonne lecture

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    siliamnerack

    Re : Extraction acides nucléiques totaux

    Pourquoi avez vous besoin des ADN et ARN pour cette qPCR? la présence de pathogènes est détectée par une modification de l'expression de certains gènes? ou bien ce pathogène modifie la séquence d'ADN de l'hôte?

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