Extraction protéique dans du laemmli.

[invite5ad0da71]

Bonjour,

je voudrais faire une extraction protéique directement dans du laemmli, j'ai déjà essayé une première fois, et le ponceau de ma membrane (je veux faire un western) était particulièrement moche, l'extrait avait l'air dégradé.
Je veux faire des extraits de plantules d'arabidopsis, et j'avais fait comme avec mon tampon d'extraction classique, cad, broyage dans le laemmli au piston (dans la glace, je me doute que c'est pas très bon pour le SDS qui est dans le laemmli), suivi d'une centri à 4°C et avant dépôt sur gel, 95°C 5min. Auriez-vous une technique plus sûre pour avoir des beaux extraits?
broyer les tissus avant, centri à T° ambiante, ou autre!

merci!
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[invite0d608256]

Bonjour.
Il y a un moment que j'ai pas boser sur les plantes mais bon.
Moi j'aurai bouillit mes échantillons avant de centrifuger pour enlever les débris.
Cette ébullition sert à dénaturer les protéines mais permet aussi d'extraire tes protéines.


Sinon je sais qu'il existe un tampon d'extraction tout près chez BIORAD qui permet de faire cette extraction puis de déposer directement sur gel...

[invite5ad0da71]

désolée, je viens de me rendre compte que je ne t'avais pas remercier! l'extraction a été faite et réussi!

[invite02cefc91]

Oui, il suffit de broyer dans un mortier refroidi à l'azote liquide.

Tu reprends ensuite un volume de poudre avec 3-4 volumes de laemli.

5 min à 95°, et c'est prêt ! A table

[A voir en vidéo sur Futura]