je suis un nouveau dans ce forum, j'ai un soucis, je voulais faire des culots cellulalires à partir des boites 35mm de cellules transfectées , la derniere fois javais pas beaucoup de prot en dosage lowri sachant bien que je gratte ma boite de cellules dans du PBS et je centrifuge 1000 RP 2min, après je lyse mes cellules dans du leamli 2X et je l'ai dose et ce que kelk'un pourrait me donner un protocol. je voulais faire un western derrière pour voir une presente de proteine
c'est quoi la difference entre protéine soluble et protéine insoluble: jé fait une purif et du coup jé eu une proteine mais cété pas la bonne yavé une patate mais finalement c'est la bonne prot ils m'ont di c insoluble?????
ta protéine soluble, tu peux la retrouver dans ton éluant tandis que l'insoluble, si tu veux la purifier, il te faut une chromato d'affinité pour être sur de n'avoir qu'elle
Merci c'est très gentil et ta réponse était rapide, effectivement j'ai utilisé une résine talon mais j'ai pas pu avoir cette protéine en blot sachant que je l'ai pas encore eluer.
j'ai une autre question differente? je voulais peter un culot de cellules cultivées dans des boites 35mm j'utilise le grattage dans du PBS 1X la kestion à combien je centrifuge pour avoir un bon cult sachant que la derniere fois javais presque rien de materiel
quelles cellules, quelle protéine (localisation, type, expression..)?
Merci d'écrire correctement sur nos forum.
Pour la modération,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
sALUT
excusez moi piwi, mais j'ai étté pressé, j'ai pas eu encore de réponse? tu peux me répondre? par avance merci j'ai un stress é je vais faire cette manip cette semaine
Ok je m'explique: les cellules sont des cellules U2OS osteosarcoma cells, la prot est une phosphoerk ERK1/ERK2 , mais je détecte aussi des prot cytoplasmiques, merci pour la réponse c urgent
