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Problème de pousse HEK 293 après transfection



  1. #1
    azur7

    Question Problème de pousse HEK 293 après transfection

    Bonjour à tous,

    Je demande de l'aide : depuis quelque mois je suis confrontée à un nouveau problème : mes hek ne poussent plus après tranfection. La transfection en apparence ne perturbe pas mais 24 heures après celle ci la pousse cellulaire s'arrête et les cellules forment des petits tas très sérrées et puis meurts... pas de contamination visibles; pas de trouble du milieu, pas de changement de couleur...essai sur différents passages et origine cellulaires et sur deux type de tranfections: mêmes résultats. pas d'effet des boites de garde qui elle continuent à poussées normalement. SI quelqu'un a des idées...A noter que 'jutilise les mêmes cellules depuis 5 and et avec le même protocole de transfection qui fonctionnait parfaitement jsuque là..
    Merci d'avance

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    LXR

    Re : Problème de pousse HEK 293 après transfection

    Bonjour et bienvenue sur Futura Sciences,

    As-tu testé la présence de mycoplasme?

  4. #3
    U.N.Owen

    Re : Problème de pousse HEK 293 après transfection

    Ca rate pour différents clonages ou toujours sur le même ? Tu as essayé avec un plasmide vide voir sans plasmide (juste medium + transfectant) pour savoir d'ou peut venir le problème ?

  5. #4
    azur7

    Re : Problème de pousse HEK 293 après transfection

    Merci pour vos réponses. Non je ne pense à une contamination mycoplasmique : aucun signe probant et les cellules non transfectées cad les boites de gardes ne présentent aucun problème. je côte les boites avec de la polylysine : j'ai d'abord cru à un problème de concentration de celle ci j'ai donc changé le coting. pas de changement.
    De plus pour les mycoplasmes nous avons changé de cellules et redécongelées : pas de changement!! incompréhenssible sauf ( il faut que je vérifie auprèsde ma collègue) si il s'agit du même pool cellulaire. sauf que les mycoplasmes d'après ce que je sais n'empeche pas les transfections en tout cas pas en tuant les cellules sauf si c'est un envahissement et alors il existent des signes. Pour en avoir l'expérience j' n'ai constaté aucun signe de contamination mycoplasmique visible.
    Ca rate sur tous les types de clonages que 'lon possède au labo ancien ou nouveaux plasmides anciens ou nouvelles prépations de plasmide. et pour différents types de lipofectamine en sirna ou en transfection classique. On a toujours cet arrêt de croissance 24 heures après avec mortalité cellulaires et agrégation cellulaires comme ci le fond des boites étaient toxiques ( d'ou ma suspicion de la polylysine). Je n'ia jamais vu ça en 12 d'expérience...

    Effectivement je pourrais faire un témoin sans DNA. mais le dna utilisé l'a déjà été auparavant alors j'ai pensé à une contamination virale mais je suis novice en la matière. De plus on vient de déménager et donc nouveau locaux nouvelle hotte décomtaminée et rebelotte.
    Je ne sais pas quoi penser on a redécongélé une nouvelle fois jeudi donc je vais voir.

  6. #5
    U.N.Owen

    Re : Problème de pousse HEK 293 après transfection

    Tu changes le milieu 6 a 8 heures après transfection ? J'avais remarqué que quand je ne changeais pas le milieu la lipofectamine ralentissait la division cellulaire et entrainait une mortalité partielle de mes cellules.

  7. A voir en vidéo sur Futura

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