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Problème transfert nothern blot MOPS



  1. #1
    DocBrownd

    Problème transfert nothern blot MOPS


    ------

    Bpnjour,
    y en a t-il parmi vous qui ont déjà effectué avec succès un northern blot en utilisant un gel MOPS ?

    En effet, j'essaye de réaliser un NB avec crosslink chimique (EDC) et non UV (afin d'augmenter la sensibilité dans le but de voir des miRNAs issus de snoRNA), or pour cela j'utilise de l'EDC (un carbodiimide). Le problème est que son action est "quenchée" par les groupements amide du tampon TBE utilisé classiquement pour faire les gel de NB.
    Donc, j'utilise un gel MOPS comme préconisé par les auteurs de cette technique (MOPS-EDTA-citrate de sodium), seulement voilà, il se trouve que les ARNs présent sur le gel ne migrent pas vers la membrane ( membrane zeta-blot, neutre).


    La migration est de type semi-sec, faite à 20V et 3mA/cm² pendant 45min.
    Lundi je testerais en augmentant le temps de migration, mais si certain d'entre vous utilise ce même protocole avec succès je veux bien quelques conseils merci

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  3. #2
    DocBrownd

    Re : Problème transfert nothern blot MOPS

    J'ai oublié de préciser que je fais un gel acryl-urée 8%

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