Pourquoi utiliser un FRET pour la détection d'une protéine

[invite3a8ed84a]

Bonjour,
je sais j'ai déjà posté un message à peu près similaire mais je n'arrive décidément pas à comprendre pourquoi on utilise deux fluorophores. Par exemple, dans mon cas, je dois utiliser de la GFP et de la mcherry juste pour détecter la présence de protéine ... seulement je ne vois vraiment pas pourquoi on ne se contente pas de la GFP seule.. Pourquoi deux ??! en plus je ne comprends pas pourquoi ils ne seraient pas couplés sur le même plasmide. Il s'agit de deux construction différentes !?
merci d'avance
-----

[inviteb4e69e1e]

Bonsoir,

Donne un peu plus de précision. Le FRET est utilisé pour déterminer la présence d'un fluorophore à proximité d'une autre fluorophore. Est-ce que ta protéine entre en interaction avec une autre protéine sur laquelle tu as mis ton autre fluorophore? est-ce que ta protéine va être clivée entre tes deux fluorophores? est-ce que tu t'intéresse au repliement spécifique d'une protéine? Tout ceci sont des exemples qui sont principalement investigué à l'aide de FRET...

Cordialement,

Astro

[invite853321bf]

Le FRET ou Fluorescence Resonance Energy Transfert est un mécanisme physique qui est très appréciée en biologie. Pour faire simple, si tu excites un fluorophore avec la longueur d'onde adaptée (appelée A), il émettra en retour une autre longueur d'onde spécifique qu'on appelera B.
Dans ton cas, si par exemple on veut le moment où deux protéines sont liées, le FRET peut nous permettre de le voir, voir même de quantifier ces couples.
Le FRET décrit le transfert de l'énergie du premier fluorophore à un second dans le cas où ils sont très très proches. Ainsi en émettant A, l'énergie qui devait permettre B est transférée au 2d fluorophore qui émettra alors C.

Ceci pourrait peut être t'aider