Le clonage

[invitee30602e9]

Bonjour,

Je suis devant un exercice où je dois donner les différentes étapes me permettant de construire un plasmide recombiné. Celui-ci ayant deux site de restriction CpoI. Je dois y inserer un gène, mais dans la séquence de part et d'autre du gène je n'ai pas de site de restriction. Comment créer les extrémités débordantes complémentaires à celles du plasmides une fois ouvert?
J'ai en plus sur ce plasmide, un gène de résistance à la Kanamycine, comment se fera son expression? (je pense par des ARN polymérases provenant du génome bactérien)

Merci d'avance
-----

[Flyingbike]

dommage j'avais rtépondu sur l'autre post.

Je disais qu'il fallait juste amplifier le gène par PCR en ajoutant des sites de restrictions CpoI dans les amorces, digérer le produit de PCR et assembler le tout.

Pour le gène de résistance, il s'exprime comme n('importe quel autre gène bactérien.

[invitee30602e9]

Oui je l'ai vu sur l'autre post! J'avais créé un post a la base mais ça a bugger du coup j'ai u trois post d'un coup! En tout cas merci de ta réponse et a bientôt