Clonage vs PCR pour séquençage?

[invite69c9c3c8]

Bonjour,
J'ai quelques difficultés à comprendre pourquoi dans un séquençage shotgun on utilise nécessairement un clonage des séquences, tandis que pour du pyroséquençage on peut simplement utiliser une PCR ce qui rend l'opération beaucoup plus rapide. Il doit y avoir une subtilité que je ne vois pas dans les protocoles, qui empêche d'utiliser une simple PCR pour du shotgun, mais je vois pas laquelle.

Merci!
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[invitec9f0f895]

salut

Je ne vois pas de raisons théoriques si ce n'est que les sequençages à partir de PCR sont toujours moins "beaux" que ceux effectués à partir d'un clonage. Les amorces doivent avoir du mal à s'apparier sur le fragment PCR qui n'est pas surenrouler.

Yoyo