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Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !



  1. #1
    namisama

    Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !


    ------

    Bonsoir

    en tp nous avons extrait l'adn plasmidique de deux cultures bactériennes par la technique de lyse alcaline. Puis nous avons mesuré la DO à 260 230 et 280nm...
    On nous fait ensuite calculer la pureté de notre adn... On nous rappelle que si le rapport est >2 alors c'est qu'il reste trop de solvant... Et si il est <1.8 c'est qu'il y a des protéines...

    Mais voilà, je ne sais pas quoi en déduire. Si notre adn n'est pas pur, la suite des manipulations est faussée ?? La pureté de l'ADN joue sur quoi ?
    Est ce que la quantité d'ADN qu'on calcule est fiable si l'ADN est contaminé par des protéines ou du solvant ?

    On nous a fait aussi fait faire une électrophorèse avec dans un puit l'ADN plasmidique de la première souche et dans un autre puit, l'ADN plasmidique de la deuxième souche. On nous demande d'analyser ce résultat.
    ??
    Ca sert juste à confirmer qu'on a bien seulement l'adn plasmidique ?

    Désolée si mes questions sont floues ! J'aimerais, en fait, qu'on m'explique pourquoi on nous fait calculer la pureté de l'adn et analyser le profil électrophorétique de migration des ADNs seuls.

    merci

    -----

  2. #2
    chamouulox

    Re : Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !

    Bonjour,

    Pour en avoir déjà fait l'expérience, la transfo ou les PCR avec des ADN purifiés dans lesquels il reste trop de solvant ca marche moyen (le solvant gène voire inactive les enzymes)..

    Tes calculs pourront etre utilisés pour déterminer la quantité d'ADN a utiliser dans tes manip, et expliquer leur rendement.

    Pour l'electrophorèse, oui ca peut te servir a ca : voir que t'as pas d'adn chromosomique, que t'as bien ton plasmide, etc

    Cham,

  3. #3
    noir_ecaille

    Re : Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !

    Petite correction... Pour faire une bonne extraction de gènes plasmidiques, il vaut mieux éviter que le solvant gêne la lecture
    "Deviens ce que tu es", Friedrich W. Nietzsche

  4. #4
    namisama

    Re : Petites questions autour de l'extraction d'ADN plasmidique !

    Merci bien

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