Bonjour tout le monde, je voudrai savoir comment faire pour extraire de L'ADN plasmidique à partir de n'importe quelle bactérie.
J'ai cherché sur le net, mais y'a pas grand chose
Si vous pouvez m'aider ça serait super
Bonne journée les amis
Merci d'avance
A partir de n'importe quelle bactérie, c'est difficile de savoir puisque cela dépendra de la présence d'une capsule polysaccharidique, d'une paroi résistante à la lyse,...
Sinon pour les bactéries classiquement utilisées en labo de bio mol (E. coli principalement), de nombreux kits d'extraction de plasmides existent sous les noms mini- (environ 100 mL de culture bactérienne), midi- (250 mL de culture), maxi- (500 mL) ou mega-prep (1L et plus) et sont fournis par des compagnies comme Qiagen.
globalement les étapes sont les mêmes pour les diverses bactéries.
Digestion enzymatique de la paroi et/ou lyse mécanique des cellules (par exemple avec des micro billes en ver dans un tube que tu vortex en présence des cellules bactériennes). Il faut procéder à cette lyse dans un tampon de lyse contenant notamment de l'EDTA pour protéger le matériel génétique des DNAses et éventuellement des dénaturant protéiques tel que le SDS et le béta-mercaptoéthanol. Après tu as besoin de connaitre uniquement les étapes d'extraction ou également les étapes de purification?
Quel est ton niveau d'étude (pour adapter les réponses).
A oui aussi: le SDS sert également a désorganiser les membranes car c'est une molécule amphiphile qui va s'y insérer. vous pouvez également procéder a un choc thermique pour fragiliser les membranes.
Toujours bien manipuler dans la glace pour éviter l'action des DNAses.
