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extraction d'ADN



  1. #1
    mkh

    extraction d'ADN


    ------

    salut,
    J'ai effectué une extraction d'ADN au phénol chloroforme après je m'aperçois que l'ADN n'est pas pur, autrement dit il y'a des restes des protéines et des lipides j'ai repris l'extraction à partir de phénol qui me permet de se débarrasser des protéines et le chloroforme pour éliminer les lipides , en mettant 2µL SUR GEL D'AGAROSE je n'ai pas obtenu de bande j'ai dilué le culot dans 50µl d'eau que dois je faire dois je prendre 6 µl de l'ADN sur gel ou bien dois je refaire la manipulation je n'ai pas envie de tout refaire je suis pressée mon encadreur m'a demandé de lui donner un compte rendu dans les plus brefs délais
    S'il vous plaît qui peut m'envoyer une démonstration d'un SDS page en puits confondus et c'est quoi l'intérêt?
    cordialement,
    mkh

    -----

  2. #2
    bifido2012

    Re : extraction d'ADN

    Bonjour mkh,

    J'ai pas très bien compris ton message, mais si tu doute que tu n'as pas assez d'ADN, donc tu ne vois rien sur gel, tu as 2 solutions, soit tu charge ton gel avec plus de volume (6µl ou même plus), sinon, tu peux aussi sécher ta suspension d'ADN au speedvac pour pouvoir concentrer ton echantillon.
    Mais est-ce que tu as fais un dosage de ton ADN? quelle est ta concentration? il est possible que tu aies perdu ton ADN en refaisant ton extraction d'ADN.
    Si au contraire, tu pense que tu as un échantillon très concentré, donc tu n'arrive pas à obtenir des bandes nettes, ben tu n'as qu'à dilué ton échantillon
    bon courage!

  3. #3
    mkh

    Re : extraction d'ADN

    merci pour votre collaboration pour le speedvac je pense que le principe est semblable à celui d'un lyophylisateur n'est ce pas ?sinon pour le sds page c'est quoi l'intérêt de faire des puits confondus pouvez vous m'envoyer une démonstration?
    cordialement,
    mkh

  4. #4
    bifido2012

    Re : extraction d'ADN

    Salut,

    le speedvac, c'est comme une centrifugeuse sous vide avec un système de chauffage. C'est un système qui contrôlent le vide et la température pour avoir une meuilleure évaporation des échantillons. Donc c'est différent de la lyo.
    Je ne comprends pas la question du SDS page. Toi pour visualiser ton ADN tu as besoin d'un simple gel d'agarose non pas de SDS page.
    Bon courage

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