extraire de l'ADN

[inviteefaf1d18]

Bonsoir ,

je suis entrain de faire une recherche sur le mode de protection d'ADN contre les enzymes ( telle que l'ADNase) et le rôle de EDTA dans cette protection

j'ai trouvé quelque chose à propos de ça mais en anglais et çava perdre beacoup de temps pour que je pourrai comprendre , j'ai quelques information sur l'EDTA c'est qu'il est un chélateur des ions ( il attire certain ions comme le Mg2+ par formation des liaison covalents ) et qu'il est un inhibiteur de nucléase ( je ne comprend ni le mécanisme ni le fonctionnement de cet effet )

pour la protection d'ADN , est ce qu'il y une relation avec la alkylation ( méthylation ) ?

SVP je voudrais savoir comment peut-on se protéger de ces enzymes ( le mode de protection ) et le rôle de l'EDTA dans cette protection

MERCI d'avance
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[inviteefaf1d18]

aucune idée ?

[invitef6c1d3c5]

L'EDTA est un chélateur d'ion divalent positif, autrement dit, il va capter les ions divalents comme l' Mg2+, or il se trouve que beaucoup d'enzymes ont besion d'ion divalent pour fonctionner, comme la DNase I par exemple. L'EDTA va donc empecher le fonctionnement de l'enzyme en bloquant son cofacteur.
Pour le reste, certaine enzyme de restriction sont effectivement incapable de couper l'ADN si celle-ci es méthylée au niveau du site de coupure (à l'inverse il existe des enzyme qui cliveny spécifiquement ces sites)

voilà en espérant que cela vous éclair.

[inviteefaf1d18]

Merci pour votre réponse ,
" couper l'ADN" tu veut dire séparation des deux brins ,? j'aimrai savoir par quoi et comment peut-on méthyléé l'ADN ( la méthode )
merci d'AVance

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitef6c1d3c5]

Non, une enzyme de restriction coupe au niveau de la liaison 5'-3' phosphodiester entre 2 nucléotides sur les 2 brins, en aucun cas elles ne vont séparer les 2 brins d'ADN (c'est plus le rôle des hélicases par exemple).
La méthylation (dans le cadre de la protection contre des enzymes de restriction) est effectué par des méthyltransférases qui vont reconnaître un site de coupure d'une enzyme de restriction et vont ajouter un groupement méthyle au niveau de ce site (souvent au niveau d'une cytosine). La plupart du temps, le donneur de méthyle est la SAM (S-Adénosine-Méthionine).

Après pour méthyler in vitro un plasmide par exemple, suffit d'utiliser une bactérie : en insérant le plasmide dans la bactérie, celle-ci va automatiquement le méthyler. Sinon, suffit de mélanger dans un tube du plasmide avec une méthyltransférase, de la SAM, du tampon (perso je n'ai jamais fait l'un ou l'autre donc sa reste théorique, vu que je ne sois pas quelle expériences nécessiterais la méthylation d'un plasmide).