Enhancer trap

[petitelectron]

Bonjour,

quelqu'un saurait il m'expliquer le principe de la méthode enhancer trap ? La plupart des sites que je trouve sur internet ne sont pas très clairs

Merci
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[petitelectron]

En fait je pense avoir compris le système en gros mais je vois pas à quoi ca sert ?? :'(
pour P-GAL4 par exemple, il va y avoir insertion de GAL4 dans une souche et insertion de UAS + un gène rapporteur dans une autre souche si on les croise :

un enhancer va permettre l'expression de GAL4 qui va induire l'expression du gène rapporteur via UAS .... mais je vois pas l'intérêt de faire ça ?? c'est horrible... on peut en conclure quoi ?

Merci bien

[Gordak]

Salut

Il peut être utile de savoir quelles sont les souches qui ont reçu l'ADN (plasmides ?) que tu essaies de leur transmettre. Si tu veux transmettre deux plasmides différents, la taille pourrait par exemple être un facteur limitant. Tu voudras donc choisir les souches qui ont incorporé les deux plasmides, d'où le test de complémentarité.

Gordak

[petitelectron]

Mon problème est ailleurs je crois ...

Je ne comprends pas l'utilité d'un transposon de la sorte...

Je comprends qu'on utilise un élément P si on veut insérer un nouveau gène ou surexprimer un gène...

Mais je ne vois pas l'utilité d'insérer un facteur de transcription dans une souche .. et un gène rapporteur dans une autre.. à part pour voir que quand on les croise il y aura expression du gène rapporteur .. je ne vois pas la finalité ? le but ? et donc ? Y a t il une suite ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[Gordak]

Comme dit avant, tu voudras peut-être exprimer plusieurs gènes, ou combinaisons de gène. Or, il est peut-être difficile de tous les mettre dans un même plasmide. Il est de plus très couteux. De façon à faciliter l'insertion de nouveaux gènes, ou séquences d'ADN, il est préférable de les insérer individuellement, chacun sur leur plasmide.

Admettons que tu veuilles insérer deux gènes, A et B. Sur le plasmide a, tu y mettras un facteur de transcription (exogène) + gène A. Sur un plasmide b, tu y mettras l'enhancer (spécifique du TF) + gène rapporteur + gène B. Ensuite, tu sauras que les colonies qui expriment le gène rapporteur ont forcément les deux plasmides intégrés. Généralement le gène de sélection procure une résistance à un antibiotique ou à l'environnement de culture, ou simplement colore les colonies.

J'espère que ça répond mieux à ta question.

Gordak