Salut à tous,
j'ai une petite question de BM à vous poser car je bloque ... voilà je fais actuellement du clonage dans mon labo, après digestion de mon insert et de mon vecteur avec une enzyme appropriée je CIP mon vecteur. J'aurai voulu savoir quel est le mécanisme de cette enzyme pour retire le 5'P et qu'il y ait un 3'OH à la place ??
Après, pour la ligation, je ne comprends pas comment elle peut avoir lieu entre l'insert et le vecteur si on a plus de 5'P au vecteur ?! La ligase utilise t'elle de l'ATP présent dans les buffer pour "refaire" des 5'P pour la ligature??
merci de vos réponses
-----