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Ligation Vecteur/insert après traitement CIP



  1. #1
    Switch31

    Ligation Vecteur/insert après traitement CIP


    ------

    Salut à tous,

    j'ai une petite question de BM à vous poser car je bloque ... voilà je fais actuellement du clonage dans mon labo, après digestion de mon insert et de mon vecteur avec une enzyme appropriée je CIP mon vecteur. J'aurai voulu savoir quel est le mécanisme de cette enzyme pour retire le 5'P et qu'il y ait un 3'OH à la place ??
    Après, pour la ligation, je ne comprends pas comment elle peut avoir lieu entre l'insert et le vecteur si on a plus de 5'P au vecteur ?! La ligase utilise t'elle de l'ATP présent dans les buffer pour "refaire" des 5'P pour la ligature??

    merci de vos réponses

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    Switch31

    Re : Ligation Vecteur/insert après traitement CIP

    personne ?!

  4. #3
    Yoyo
    coresponsable des forums

    Re : Ligation Vecteur/insert après traitement CIP

    Salut

    Il y a les P de l'insert ce donc sont ceux la qui vont se ligaturer. l'autre extrémité ne peut pas etre ligaturée mais elle le "trou" sera réparé par coli lors de la transformation.

    Yoyo

  5. #4
    Switch31

    Re : Ligation Vecteur/insert après traitement CIP

    ah d'accord merci beaucoup ! tu sais quels enzymes de réparation cela implique ?
    c'est vrai que j'avais oublié cette hypothèse .........

  6. A voir en vidéo sur Futura

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