Aide pour un protocole.

[invite7d532bed]

Bonjour, je suis bloquer a un exercice de mon devoir maison. Il s'agit de créer un protocole.

Rechercher la presence d'une enzyme.

Probleme: Le suc pancreatique contient de l'amylase. On cherche a savoir si des enzymes capables d'hydrolyser les proteines ( proteases) sont également présentes dans un extrait pancreatiques.

Conception:
En utilisant le materiel proposé, concevez puis mettez en oeuvre un protocole adin de répondre au probleme posé.

Materiel:
-colorimétre ou turbidimetre relié a une chaine d'acquisition ExAO
-solution d'amylase
-solution de pancreatine (extrait pancreatique)
-Solution d'ovalbumine coagulée en suspension.

Voila, je n'arrrive pas du tout a démarrer.

Merci de votre aide.
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[pstoneV]

Il faut penser à définir les termes que tu ne comprends pas ou les notions que tu as du mal à capter.

-L'amylase est une enzyme contenu dans ton suc pancréatique
-les albumines sont des protéines.
-les protéases hydrolysent les protéines.
-le colorimètre va te permettre de comparer les différentes solutions

Tu as besoins d'une expérience témoin et de l'expérience qui traduit ce qui se passe dans la réalité, dit toi que l'ovalbumine une fois hydrolysée n'a pas la même coloration qu'au départ (la solution devient plus claire).

Avec ça du devrait pouvoir démarrer et même finir

[invite7d532bed]

Merci de ton aide.

Donc on cherche a savoir si il y de la protease dans l'amylase ?

Est ce que l'experience témoin doit-etre albumine+protease puis on mesure sa couleur avec le colorimetre.
Et la deuxieme est amylase+albumine.

J'ai également un graphique d'absorbance d'une solution d'albumine en presence d'amylase et de protease, avec une courbe d'amylase et une courbe de protease. l'amylase reste constante alors que la protease diminue au cours du temps.

je dois exploitez le graphique pour repondre au probleme.

Mais avec le graphique je ne vois pas comment on peut repondre vu que c'est un graphique sur l'albumine.

[pstoneV]

Non la protéase et l'amylase sont deux enzymes distinctes. On cherche a savoir si il y a de la protéase en plus de l'amylase.

L'expérience témoin c'est en présence d'amylase uniquement et d'albumine et on passe la solution au colorimètre (en résultat tu trouverais que la couleur de la solution ne change pas).
La deuxième est amylase + suc gastrique (c'est ce qu'il y a dans l'estomac)

[A voir en vidéo sur Futura]

[Moustik34]

C'est justement l'albumine que tu mesure au cours du temps, pas l'amylase ou la protéase. L'albumine coagulée a une certaine absorbance. Au cours de sa digestion, l'absorbance diminue. Donc tes graphiques sont très logiques. C'est un graphique d'une expérience que tu as déjà réalisé ou c'est ton prof qui te l'a donné pour résoudre le problème? En tout cas, le but de ton expérience est de vérifier si tu as des protéases dans ta solution pancréatine, donc y a un moment donné où il faut la tester avec une protéine. Du coup peut être que je me trompe mais je ne comprends pas le but de amylase + suc gastrique ?? y a rien à dégrader dans cette expérience.

[pstoneV]

Merci moustik34 effectivement j'avais oublié l'albumine !

[Moustik34]

y a pas de quoi mais le fait est que je comprends quand même pas pourquoi tu mettrais amylase + solution pancréatine + albumine, puisqu'on sait déjà que l'amylase ne dégrade pas l'albumine et qu'il y a déjà de l'amylase dans la solution pancréatine.

[pstoneV]

C'est pour bien mettre en évidence que l'amylase n'est pas la protease AieOpich s'étant trompé sur ce point c'était pour le mettre en évidence

[Moustik34]

aaaah ok, au temps pour moi alors

[invite7d532bed]

Merci beaucoup de votre aide.

Donc si j'ai bien compris l'experience temoin est amylase+albumine puis on la passe dans le colorimetre
Et l'experience est amylase+ albumine + suc pancreatique puis on la passe dans le colorimetre.


Mais comment on voit qu'il y a des protease ? grace au colorimetre ?

[invite7d532bed]

Bonjour Moustik34, merci de ton aide, et c'est un graphique que la prof nous a donnée, on commence juste l'enzymologie.

[pstoneV]

Comme ce n'est pas l'amylase qui hydrolyse les protéines (ici l'albumine), si il y a un changement de l'absorbance (que tu observe avec le colorimetre) avec ta solution de suc gastrique c'est qu'il y a une enzyme qui hydrolyse les protéines dedans (la protéase).

[invite7d532bed]

Merci beaucoup de m'aider.
Je comprends pas tout.
dans mon graphique il y a la chute d'absorbance de la protease, c'est un grpahique d'absorbance de l'albumine. je n'ai aucun autre résultat.

[Moustik34]

mais ce n'est pas l'absorbance de ta protéase que tu étudies, c'est de ta protéine, c'est à dire l'albumine. Ta protéine totale au fur et à mesure de sa dégradation par les protéases va absorber de moins en moins, tu verras donc une chute d'absorbance. Sur ta courbe, s'il y a écrit "protéase", c'est pour dire qu'on a mis l'albumine en contact de protéases, mais ça ne veut pas dire que c'est les protéases que tu doses, tu comprends? Autrement dit, dans ce graphe, tu as tes 2 témoins, l'un négatif (amylase + albumine => pas de variation d'absorbance) et l'autre positif (protéase + albumine => diminution de l'absorbance). Dans ton expérience, tu va mettre en contact ta solution pancréatine avec l'albumine. Selon la variation d'absorbance au cours du temps de l'albumine tu pourras en déduire s'il ya des protéases dans ta solution. Est ce que c'est plus clair?

[invite7d532bed]

Oui c'est beaucoup plus clair merci.
donc il y aura presence de protease si l'absorbance diminue.

Merci beaucoup Moustik 34.

[Moustik34]

voilà c'est ça