Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

[invitee1fef016]

Bonjour,

J'ai besoin de votre aide.
Je dois représenter le vecteur d'expression pour former une protéine de fusion dimérique.
J'ai quelques questions:
- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus?
- Pour faire une protéine dimérique, comment on peut opérer? Je pensais qu'on pouvait par exemple prendre deux plasmides et ajouter à la fin des deux gènes d'intérêt la thioredoxine.

Merci pour vos réponses, je suis complètement perdue.
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[Pfhoryan]

Bonjour,

J'ai besoin de votre aide.
Je dois représenter le vecteur d'expression pour former une protéine de fusion dimérique.
J'ai quelques questions:
- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus?

Pour une protéine de fusion, les deux séquences codantes sont mises à la suite l'une de l'autre sans codon stop entre les deux: une seule chaîne est produite.

- Pour faire une protéine dimérique, comment on peut opérer? Je pensais qu'on pouvait par exemple prendre deux plasmides et ajouter à la fin des deux gènes d'intérêt la thioredoxine.

Est-ce que le produit du gène d'intérêt ne forme pas un dimère?

[invitee1fef016]

Merci beaucoup pour ta réponse pour la protéine de fusion.
C'est un vecteur d'expression pour la proinsuline et l'écotine. Et dans l'énoncé, il est noté que l'écotine est une protéine dimérique. Du coup, je pensais qu'il fallait faire deux plasmides. Un avec la proinsuline et l'écotine et un autre juste avec l'écotine. Du coup, je voulais ajouter une séquence pour favoriser la formation d'un pont disulfure entre les deux écotines et j'avais pensé à la thioredoxine. Est ce que mon raisonnement est bon?

[Pfhoryan]

Si l'écotine se dimérise, il suffit de faire un seul vecteur avec un gène fusionnant écotine et proinsuline, et la dimérisation de cette protéine de fusion se fera spontanément via le domaine écotine.

[A voir en vidéo sur Futura]