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Digestion avec la papaïne



  1. #1
    Djelaba

    Digestion avec la papaïne


    ------

    Bonjour à tous,

    Dans un protocole expérimental pour faire une digestion d'IgG avec de la mecuri-papaïne, j'ai remarqué qu'on ajoute
    2µL d'EDTA et 4µL de Cystéine
    Je me posais des questions quand à l'utilité de ces réactifs :

    - Je sais que l'EDTA est un chélateur d'ions divalents qui permet d'inactiver les protéines ayant besoin d'ions pour être actives, mais quelles protéines (d'autres protéases que la papaine?
    - La cystéine libère le site actif de la papaine et envelant le mercure qui le bloquait, est ce juste ?

    Merci pour vos éclaircissements à venir ^^

    -----

  2. #2
    david.khoury.lb

    Re : Digestion avec la papaïne

    Mécanisme:
    La triade catalytique active la cystéine.
    La cysteine attaque la liason peptidique.
    L'état de transition est stabilisé par l'azote de la chaine latérale de Gln
    L'histidine protonnée transfert son proton à l'azote de la chaine principale, ce qui libère la partie C-term.
    On a la formation d'un intermédiaire thio enzyme
    L'histidine active une molécule d'eau qui attaque l'intermédiaire thio-enzyme.
    La cystéine catalytique est sensible l'oxygène
    La papaine sera activé par :
    les agent réducteur de type b-mercapto-éthanol par l'EDTA qui évite que des cations inhibent la cysteine

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