bonsoir!
je viens de faire une recherche pour mon problème sur le net et je vois qu'il y a pas mal d'informations ici alors je me suis inscrite.
je fais ma thèse de microbiologie sur l'hépatite B et j'utilise un protocole PCR nichée pour amplifier le gène S. ce protocole a deja été utilisé dans le laboratoire et il marchait très bien avant.
avant de tester mes échantillons j'ai voulu vérifier la PCR et sa sensibilité j'ai donc testé un malade dont la concentration plasmatique d'ADN est connue (105) avec des dilutions successives jusqu'à 102. j'ai obtenu une très belle bande pour le tube 102 et une très faible pour le 104 et rien pour les 105 et 103!!!
1/ pourquoi j'ai une amplification pour certaines concentrations et pas d'autres sans aucune logique?
2/ j'ai testé comme meme quelques échantillons une fois avec comme témoin positif ce témoin à 102 et la PCR avait très bien marchée. j'ai restesté une 2ème fois avec d'autre échantillons et la j'ai aucune bande dans le témoin positif alors que j'ai rien changé!! meme pas de smear! sauf que dans le témoin négatif (et seulement dans ce témoin négatif) y a des bandes!!!
bref j'avoue je n'y comprends plus rien.. aidez-moi SVP