PCR et RT-PCR

[invite3202e391]

Bonjour

J'ai un peu de mal à distinguer les différences qu'il y a entre les 2 techniques de clonage que sont la PCR et la RT-PCR (Reverse Transcription)
D'abord, est ce qu'une Taq Polymerase est necessaire pour la RT PCR aussi ?
Quelle est la plus utilisée ? Et surtout, quelle différence y a t il entre une PCR et une PCR Quantitative ?

Comme c'est jamais simple à l'écrit sans couleur etc..., j'ai fait un tableau résumant très brièvement les 2 techniques avec mes connaissances, en espérant qu'ils soit correct:

Si quelqu'un pourrait me dire si j'ai oublié quelque chose d'essentiel qui sert à distinguer les 2 techniques, ce serait vraiment sympa à lui !
Merci
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[invite83634ba0]

Salut,

Je suis pas du tout spécialiste, mais d'après moi, la RT-PCR c'est juste une une reverse transcription suivie d'une PCR classique.

Donc oui tu as besoin d'une Taq polymerase pour la RT-PCR.

Pour la différence entre PCR et PCR quantitative, la différence, c'est la quantification de ton ADN produit, par spectrométrie par exemple.

Je ne sais pas si les distinctions sur le nombre de cycles sur ton tableau sont vraies, je ne vois pas pourquoi on ne ferai qu'un seul cycle sur une RT-PCR ?

bye

[invite3202e391]

Ah la RT PCR serait en fait une Reverse Transcription combinée à une PCR classique... Effectivement dans ce cas, une Taq Polymerase est indispensable et plusieurs cycles sont nécessaires aussi, peut etre une erreur quand j'ai pris mon cours alors..

En tout cas merci de ta réponse !

[invitebbbd6fea]

La RT-PCR (Reverse Transcription - PCR) est effectivement une RT suivie d'une PCR.
Pour donner un exemple, si on veut amplifier des ARNm, on peut utiliser une amorce poly-T qui va venir s'hybrider sur la queue poly-A des ARNm. L'enzyme RT va ensuite allonger cette amorce et synthétiser l'ADNc (attention, il me semble qu'on parle d'ADNc uniquement quand il s'agit d'ADN obtenu par transcription inverse). On va ensuite pouvoir effectuer une PCR classique sur ces ADNc (c'est alors qu'on va cibler la région d'intérêt, puisqu'on a rétro-transcrit l'ensemble des ARNm).
Dans la PCR quantitative, on va quantifier la quantité d'ADN présent dans un échantillon X en comparant l'intensité de la fluorescence émise par l'échantillon pendant l'amplification aux intensités d'une gamme d'ADN dont on connaît les quantités, amplifiés en parallèle.

Concernant le tableau, quelques remarques :
1°) Je l'ai déjà dit, mais le terme d'ADNc est, il me semble, limité à l'ADN obtenu par transcription inverse.
2°) Attention, la matrice de la transcription inverse est l'ARN, mais la matrice de la RT-PCR est l'ADNc.
3°) Une PCR classique nécessitera au moins 2 amorces (toujours par couples d'amorces), alors que la RT-PCR nécessite 1 amorce pour la transcription inverse, puis les amorces de la PCR effectuée sur l'ADNc.
4°) OK pour le nombre de cycles de la PCR. Pour la transcription inverse, on va raisonner en temps d'incubation, pas en cycles. Par contre, pour la PCR sur l'ADNc le raisonnement est le même que pour la PCR classique (nombre de cycles).

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3202e391]

ok merci je comprends mieux

Finalement dans mon cours je pense qu'en parlant de RT PCR, le prof désignait en fait la Transcription Inverse toute seule, d'ou le fait que pour lui il n'y ait besoin que d'une seule amorce !

Merci en tous cas