interpretation electrophorese d'un plasmide purifié

[invite1fa3bdab]

bonjours tout le monde je voudrai de l'aide car j'arrive pas a bien interpréter le résultat d’électrophorèse d'un plasmide pUC19 qu'on a purifié merci voici la photo:

electro.jpg
merci d'avance
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[invite2ac96057]

Il va falloir plus de détails, quand tu dis purifié y a t-il eu digestion par enzyme de restriction après? Parce que ça ne m'a pas l'air d'être du plasmide circulaire tout ça! De plus il y a plusieurs puits pour la même chose?
Tu peux aussi déjà dire que la migration n'a pas été géniale, le ladder n'est pas top

[invite1fa3bdab]

Bonjour et bien non y'a pas eu digestion par des enzymes en fait on just purifier et on a fait une electrophorese . on a plusieurs puits parcequ'on etait nombreux et chacun a deposer son plasmide purifie .Merci

[invite2ac96057]

ok et alors autre question c'est quoi comme marqueur??? C'est un supercoiled ladder?
Parce que la seule interprétation de ton gel c'est sur la taille de ton plasmide, si tu n'as pas fait de disgestion. Et sur la quantité mais là c'est quand même très relatif

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite1fa3bdab]

en fait l'enseignant ne nous a rien dit sur le marqueur , c'est pour cela que je n'arrive pas a interpréter si sa peux vous aider il avait dis que le plasmide faisait 5000pb comment il a su ? je ne sais pas . merci

[invite2ac96057]

Si il fait 5000bp alors le marqueur pourrait être un supercoiled ladder! mais c'est pas la question, si tu connais la taille du plasmide que tu as fait migrer et que tu ne connais pas le ladder utiliser la seule interprétation que tu peux faire de ce gel c'est sur la quantité d'ADN par puit. Malheureusement sans connaitre le ladder tu ne peux pas faire une estimation de cette quantité. Tu peux juste dire qu'il y a dans un puit plus que dans l'autre.
Si il vous as dit que ça correspondait à 5000bp il faudrait peut être faire une petite recherche sur le plasmide lui même!!! Je ne vais pas donner la réponse c'est très facile à trouver

[invite1fa3bdab]

et si on suppose que le marqueur est un supercoiled ladder comment on l’interprète?? merci

[invite2ac96057]

si c'est un supercoiled la taille de 5000bp semble bonne.
Les supercoiled ladder, que je connais, ont comme poids en 4ème bande 5000bp

[invite1fa3bdab]

moi je vois qu'on a deux bandes une légère qui correspond a l’ADN génomique de la bactérie et la bande épaisse en dessous c'est notre plasmide circulaire purifié

vous en pensez quoi?

[invite1fa3bdab]

désolé je me suis trompé la bande légère c'est l’ADN circulaire et l’épaisse c'est le super enroulé

[invite2ac96057]

Oui c'est possible ça veux dire qu'une étape de la purification a été laissé posé trop longtemps. Je ne sais pas si vous avez utilisé un kit pour faire ça mais il y a une étape où effectivement le temps d'incubation est assez critique pour ne pas avoir de contamination d'ADN de haut poids moléculaire

[invite1fa3bdab]

OK merci bcp . j'ai aussi un autre problème avec cette fois ci une électrophorèse ou on a utilisé des enzymes de restrictions EcoR1 et Hind3 avec notre plasmide

Sachant que dans le puits 1 on a just notre plasmide purifié pUC19
puits 2 on a plasmide +EcoR1
puits 3 on a plasmide + EcoR1+Hind3
ce que je ne comprend pas c'est que le site de coupure de EcoR1 et Hind3 est le même alors que sur toutes les doc que j'ai consulté ils disent que hin3 a deux sites de restrictions eet nous on en a obtenu qu'un ??
pour EcoR1 juste un seul .
merciiii

[invite2ac96057]

et bien la seule interprétation que tu peux en avoir c'est que la digestion par HindIII n'a pas fonctionné