Bonjour,
dans une annale de biochimie ( ou il n'y a pas les corrections ) il y a un tableau de séquençage de ddN que je ne comprend pas.
On nous demande:
le brin d'adn le plus long et le plus court
si la migration s'effectue vers le pôle négatif ou positif
la séquence de l'ADN présent dans la bande entourée en pointillé
Je comprend le fonctionnement des ddN, mais avec cette image je ne comprends pas du tout où est ce qu'ils agissent.
Pouvez vous m'expliquer? Merci d'avance
Bonjour,
c'est plutôt simple si on comprend la méthode de Sanger. L'incorporation de didésoxynucléotides (ddN) arrête la synthèse d'ADN. Habituellement, comment se déplace l'ADN sur un gel d'électrophorèse (n'oubliez pas que l'ADN est chargé négativement en raison des nombreux groupements phosphates)? Sachant cela et le principe de base de l'électrophorèse, on peut savoir quel brin est le plus long et lequel est le plus court. L'ADN présent pour la question 3 est alors une formalité.
Cordialement,
Bonjour,
effectivement simple et complexe à la fois:
pour la méthode de Sanger dans un tube on ajoute l'ADN à séquencer, UNE amorce, la polymérase, des dNTP et des ddNTP, on lance la réaction de séquence (semblable à la PCR). Ici c'est l'ancienne façon de faire (l'originale). On met la même chose dans le tube mais un ddNTP différents dans chaque tube donc au final un tube avec ddNTP A, T, C, G. Lors du cycle de séquençage, la polymérase a 2 choix, un dNTP et la réaction continue ou un ddNTP et la réaction s'arrête. Heureusement, il n'y a pas qu’une molécule d'ADN dans le tube et donc les 2 possibilités vont se faire !!
Donc au final tu aura par exemple dans ton tube avec les ddNTP A :
CTCGGA
CTCGGAGGTA
CTCGGAGGTACGTA
...
Si tu réalise une électrophorèse d'agarose, on sépare par la taille et donc les petits fragments migrent plus bas que es gros.
SI tu regarde ton gel, chaque puit est un tube différent avec les ddNTP A, T, C, G
Les bandes représentent les fragments que j'ai illustré ci dessus.
Les questions sont dés lors très simples.
