Bonjour tout le monde, je suis étudiant en BTS biotechnologie, et je suis actuellement en stage dans un labo de recherche.
Je suis mené a effectuer des purifications de protéines, mais a un moment de la manip, je dois effectuer une Gel filtration, et je ne comprends pas quelle est son utilité, si vous savez venez moi en aide, si vous le voulez bien
Bonjour Waaxx,
Le gel-filtration permet de séparer les protéines dans ta solution en fonction de leur masse moléculaire, de leur taille, et de leur configuration.
Les granules du gel-filtration ont des pores avec un certain diamètre. Les petites molécules qui peuvent rentrer dans ces pores vont être ralenties, pendant que les grosses molécules migreront plus rapidement dans le gel (sans passer par les pores).
Tout d'abord merci de la réponse rapide, mais je posait plus la question pour savoir l'utilité, car dans mon protocole je sors d'une chromatographie d'affinité au cobalt, ensuite je clive le tag histidine de mes protéines, dialyse toute la nuit, ensuite je repasse sur du cobalt pour eliminer les prot non clivées, et la je fais la GF, et j'avoue trouver ça étrange sachant qu'on viens juste de purifier la prot, et qu'on l'a nettoyé de l'imidazole (dialyse)
Bonjour,
La gel filtration permet de séparer les protéines en conservant leur structure quaternaire.
A+
Salut.
Meme apres cette premiere etape de purification au cobalt la purete de ta proteine n'est pas absolue, c'est pourquoi on ajoute generalement d autres etapes, comme colonne echangeuse d ion et generalement on fini par une gel filtration pour ajouter un degree de purification (en fonction de la taille), tu vois egalement si ta proteine est monodisperse ou agregee. La gel filtration a aussi l avantage de pouvoir utiliser le tampon que l'on veut en fin de purification differente concentration en NaCl (tres utile apres une echangeuse d ion), et dans ton cas, meme apres dialyse c'est une facon d etre sur de ne plus avoir d imidazole.
PS: desole pour le manque d'accent, les anglo-saxon et leur qwerty...
