GFP-tagged protein et localisation nucléaire

[Enialix]

Bonjour,

J'ai une protéine taggée avec la GFP, et la même taggée avec HA.
Lorsque je regarde leur localisation (IF pour HA, fluorescence directe pour GFP), la HA se situe en périphérie du noyau (réticulum) alors que celle avec la GFP se situe en périphérie ET dans le noyau.

J'avais lu que cela pouvait provenir d'un clivage entre ma prot et la GFP, et que donc la GFP (étant nucléaire a la base) retournait dans le noyau. Mais je n'arrive pas a remettre la main sur l'info. Quelqu'un saurait-il me conseiller un article sur ce sujet ?

Merci d'avance,
Enialix
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[Enialix]

Personne n'aurait la moindre info à ce sujet ?

Merci,
Enialix

[Enialix]

Toujours personne ?

[Flyingbike]

Si c'est une protéine de fusion classique il n'y a pas de raison que la GFP se tire d'elle même. Peut être que la différence de taille (HA vs GFP) est à l'origine d'une localisation différente de ta construction.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite02e16773]

Salut,

En tapant "gfp nucleus" dans google tu trouves pas mal de résultats...

La première phrase de cet abstract va dans ton sens : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17586454
Sinon ici tu as quelques infos : http://www.protocol-online.org/biolo...sts/32690.html
En particulier

GFP will randomly enter because it is a small protein and can diffuse in. This is why you see it sometimes and not, usually proteins smaller then 60 kDa can enter the nucleus by simple diffusion. This is why tagging a putative NLS or NES is a great control, if you find it in the cytoplasm all the time you know your NES is working because GFP CAN enter the nucleus and vice-versa.
-CAGgenetics-

Du coup, ça me parait vraisemblable que si de la GFP se balade toute seule sans être fusionnée, elle diffuse au sein du noyau. Elle devrait aussi diffuser vers le cytoplasme si on en croit ce qui est dit ci-dessus.

Avant de parler de clivage, regarde si ça peut pas venir de ton plasmide.

[Enialix]

Merci de vos réponses.

En quoi le plasmide pourrait-il être en cause a votre avis ?