prédire digestion ADN DNAse1?

[inviteacd9329b]

Bonjour,

Je suis en essai d'un protocole de marquage de sonde. Pour ce faire, je dois digérer mon ADN Bac avec de la DNase 1. La seule information que j'ai c'est qu'il est suggéré d'utiliser 6ul de DNase 1 pour 1ug de BAC DNA de 100kb pendant 2 heures à 15 degrés C pour obtenir des fragments entre 300 et 700 bp).
Par contre, mon BAC DNA est de 160kb de long, j'ai décidé d'utiliser 0,6ug de BAC DNA pour 6 ul de DNase 1. Après digestion, je ne vois pas de bandes sur mon gel électrophorèse et ma concentration au spectrophotomètre est beaucoup trop basse pour continuer l'expérience.
Comment puis-je bien déterminer mes ratios ADN / DNase1?

Merci, Cordialement,
Véronique
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[invite4ff72fd5]

Tu as surement tout digere... As tu un smear sur ton gel d agarose? Si oui = tout digere.

Pour optimiser l experience, tu peux fixer la quantite d ADN a digerer et utiliser differentes quantites de DNAse et differents temps de digestion et regarder ensuite quelle est la meilleur condition.