Bonsoir à tous !
J'ai un TP de biologie que je devais faire en groupe mais bon y'en a toujours un/une qui travaille pour les autres
Voici le protocole de l'expérience.
1) Ajouter 8 µl d’ADN dans le tube marqué +.
2) Mettre le tube marqué + et le tube marqué - sur la glace pendant 15 minutes.
3) Incuber les tubes deux minutes à 42°C (choc thermique)
4) Replacer les tubes dans la glace pendant 5 minutes.
5) Ajouter 1 ml de LB et incuber la suspension à 37°C pendant 30 minutes (pour l’expression de la
résistance à l’ampicilline).
6) Déposer et étaler:
0.1 ml du tube + sur une boîte LA + Amp
0.1 ml du tube + sur une boîte LA
0.1 ml du tube – sur une boîte LA+ Amp,
0.1 ml du tube – sur une boîte LA
7) Centrifuger le reste de la suspension 30 secondes à vitesse maximale pour faire tomber les
cellules.
8)Enlever 0.7 ml de surnageant et le jeter.
9) Resuspendre le culot avec le reste (~ 0.1 ml) du surnageant
10) Déposer et étaler ces 0.1 ml sur une boite LA+Amp.
11) Mettre les boîtes à 37°C pendant 24 h. Les boîtes peuvent ensuite être gardées au frigo (4°C) et
incubées la nuit à 37°C avant de les observer en classe
Ma question est la suivante :
Je n'ai pas très bien compris le point 5). On ajoute 1ml de LB dans tous les tubes, dans le tube + ou alors c'est à part ?
Je me pose la question car au point 10) on ne demande d'étaler les 0.1 qui reste sur une boite LA+Amp. Et donc je ne sais pas d'ou provient le LB (d'un tube + ? )
Merci de votre aide !![]()
-----