Bonjour à tous et toutes !
Peut-être que certains savent déjà que je suis en Master II et que je travaille sur le séquençage du CYP2B6 par technique Sanger. J'en suis actuellement à 7 patients, et j'analyse mes résultats. J'ai encore des améliorations à faire puisque mes tracés ne sont pas parfaits : flash de fluo en début de fragment puis épuisement et extinction de fluo vers la fin du fragment. J'ai repéré en 2 ou 3 endroits un triple pic...L'idée maintenant est d'améliorer l'étape de purification (actuellement exosap) pour passer à l'agencour. Pensez-vous que ce soit pertinent ?
D'autre part, je dois à présent déterminer l'allèle porté par le patient. La difficulté c'est qu'il existe une trentaine d'allèle pour le CYP2B6 (*1 allèle sauvage, puis les autres allèles sont définis par 1 ou plusieurs SNP présents dans le gène). Le site CYPallele.ki répertorie tous ces allèles. Mon problème c'est que le sanger me permet seulement de savoir si mon individu présente tel ou tel SNP, homozygote ou hétérozygote, mais ne dit pas si les SNP sont sur le même brin chromosomique. Est-ce que quelqu'un a une expérience là dedans ou une idée pour surmonter cette question ??
Merci pour votre aide précieuse !
Pierre
-----