Questions purification protéine

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Bonjour à tous, je suis tombé sur une question de type examen ( biomol/biochimie) concernant la purification des protéines

1) Vous voulez purifier une grande quantité d’une enzyme se retrouvant dans le foie des rats. Vous aimeriez la récupérer sous sa forme active. Quelles méthodes de purification choisissez-vous ? (2 réponses)

A- SDS-page
B- Focalisation isoélectrique
C- Ultracentrifugation zonale
D- Précipitation saline
E- Chromatographie d’affinité


Déjà j'élimine la A, car avec la technique SDS page ,le SDS dénature la protéine et lui fait porter une charge globale négative


J'élimine aussi la D, car elle résulta d'interaction hydrophobe qui font précipiter les protéines


J'élimine la C qui consiste à séparer les complexes proétiques comme les 2 unités des ribosomes par exemple

Je coche donc la A ( j'en suis sur, c'est une technique les plus utilsées ) et par élimination la focalisation isoelectrique.. J'hésite quand même pour cette dernière vu que la charge globale de la protéine avec cette technique est forcément nulle, et certaines protéines sont actives en fonction de leur charge non ???

Merci
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[inviteb31e526f]

L'ultracentrifugation zonale et la chromatographie d'affinité sont les méthodes de purification requises pour ton exercice :
- La chromatographie d'affinité est une méthode très sensible (et très coûteuse) qui permet d'avoir une purification optimale.
- L'ultracentrifugation zonale ne brisent pas les liaisons covalentes et les ponts disulfures de ta protéine et va te permettre d'avoir des gradients de densité.

La SDS-Page dénature ta protéine, la focalisation isoléctrique brise les ponts disulfures et dénature ta protéine (utilisation d'urée et de -mercaptoéthanol) et la précipitation saline détruit ta protéine.

En espérant t'avoir aider !