contamination des boites

[waymouch]

Bonsoir à tous,
SVP quels seraient les facteurs qui sont derrière la contamination des boites de pétri (contenant milieu LB agar) avant, et après usage ( après étalement des bactéries et incubation à 37C)?
merci d'avance
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[biseibutsu]

Bonjour,

La contamination des boites est généralement la faute du manipulateur :
- Mauvais autoclavage/stérilisation du milieu
- Mauvais coulage des boites
- Mauvaise manipulation

Après, tout dépends de la contamination (champignon, bactéries...). Il y a quelque micro-organisme qui peuvent résister à l'autoclavage (spore des bactéries par exemple), et qui se "réveillent" une fois dans de bonne condition (dans un milieu au chaud, par exemple). Mais cela voudrait dire qu'il y a une contamination des ingrédients du milieu (LB, agar, eau...).
Enfin, cela peut également être le filtre de la hotte (si vous manipulez sous hotte) qui ne remplit plus sa fonction.

[waymouch]

Bonjour,

La contamination des boites est généralement la faute du manipulateur :
- Mauvais autoclavage/stérilisation du milieu
- Mauvais coulage des boites
- Mauvaise manipulation

Après, tout dépends de la contamination (champignon, bactéries...). Il y a quelque micro-organisme qui peuvent résister à l'autoclavage (spore des bactéries par exemple), et qui se "réveillent" une fois dans de bonne condition (dans un milieu au chaud, par exemple). Mais cela voudrait dire qu'il y a une contamination des ingrédients du milieu (LB, agar, eau...).
Enfin, cela peut également être le filtre de la hotte (si vous manipulez sous hotte) qui ne remplit plus sa fonction.

Merci infiniment biseibutsu. J'ai vérifié tout ça.Pour le LB agar je ne pense pas trop pour mon cas car il y a des boites non contaminées.
Est ce que l’étuve peut avoir un effet sur la contamination? Il s'agit en fait de grandes taches blanches un peu arrondies qui présentent 3 à 4 fois la taille d'une colonie bactérienne.Je pense qu'il s'agit des champignons.Merci.

[biseibutsu]

L'étuve peut être en cause, oui.
De ce que vous décrivez, il d'agit probablement de champignons. L'alcool et la javel n'ont qu'un effet limité sur ces organismes (il faut laisser agir plus longtemps).
Il existe une grande quantité d'antifongique commerciaux ultra efficace et simple d'utilisation (premier nettoyage, application, rinçage - stérilisation). Faire un grand nettoyage de printemps semble nécessaire .
Dans mon ancien labo, les salles de bactério n'était pas lavé par les femmes de ménages, et c'est nous qui devions le faire (et on ne faisait pas semblant en utilisant la javel). Ceci, plus jeter tout les vieux tubes (ou autre denrées périssables) de milieu dans le frigo depuis Mathusalem, et faire la poussière (tout ceci dans l'espoir de se débarrasser des spores de champi).
Je vais passer pour un vieux rabat-joie, mais faut également faire attention au niveau des aération de la hottes (ne pas mettre de papier dessus, bien manipuler dans la zone stérile...)

[A voir en vidéo sur Futura]

[waymouch]

D'accord,message reçu.Merci beaucoup

[JakiJake]

Lave toi les mains à l'éthanol, passe tout tes ustensiles à la flamme avant de toucher la gélose. Utilise des râteau industrielle stérile pour étaler sur gélose.

[waymouch]

merci beaucoup pour tes conseils JakiJake.
si je laisse les boite de pétri (contenant uniquement du LB agar +ampicilline mais non utilisées cad sans bactéries) à +4C, y aura t il un risque de contamination des boites ? en d'autre termes , le LB agar serait il un milieu favorable aux champignons à cette température?

[JakiJake]

Si tes gélose sont coulées avec l'ampicilline dedans et que tu a des bactéries qui poussent dessus sans les avoir ensemencer c'est très mauvais signe car ç signifierais que des bactéries résistante à l'ampicilline traîne dans ton labo et se serais très dangereux.

A quel concentration est l'ampicilline dans tes gélose ?
Je pense pas que quoique se soit puisse pousser sur gélose amplicilline à 4°C.

[TanguyE]

Normalement des géloses pré-coulées avec l'antibio se conservent pas trop mal à 4°C. Dans un frigo propre, peu de risque de pousse de champignons. Si tu préfères, tu peux les sceller avec du parafilm une fois qu'elles sont bien froides. Au niveau de la conservation, je considère qu'au delà de 2 mois si elles n'ont pas été utilisées c'est poubelle pour ne prendre aucun risque (dégradation de l'antibio, contamination...).

[waymouch]

Si tes gélose sont coulées avec l'ampicilline dedans et que tu a des bactéries qui poussent dessus sans les avoir ensemencer c'est très mauvais signe car ç signifierais que des bactéries résistante à l'ampicilline traîne dans ton labo et se serais très dangereux.

A quel concentration est l'ampicilline dans tes gélose ?
Je pense pas que quoique se soit puisse pousser sur gélose amplicilline à 4°C.

la concentration est de 100mg/ml.merci JakiJake.

[waymouch]

Normalement des géloses pré-coulées avec l'antibio se conservent pas trop mal à 4°C. Dans un frigo propre, peu de risque de pousse de champignons. Si tu préfères, tu peux les sceller avec du parafilm une fois qu'elles sont bien froides. Au niveau de la conservation, je considère qu'au delà de 2 mois si elles n'ont pas été utilisées c'est poubelle pour ne prendre aucun risque (dégradation de l'antibio, contamination...).

moi aussi je pense à la qualité de l'ampicilline. il peut se dégrader.Merci beaucoup TanguyE pour tes conseils.

[noir_ecaille]

Aah une fois on a eu un TP foiré. Nos petites géloses en surfusion avait été coulées puis ensemencées parfaitement... Sauf que l'ampicilline avait été non seulement périmée (ouverte depuis trop longtemps), mais en plus contaminée par une moisissure. Souvenir, souvenir...

De fait je plussoie TanguyE.