Bonsoir,
J'ai l'habitude au labo, d'utiliser le GFP pour le marquage fluorescent des protéines suivies.
J'ai fait des recherches sur une toute autre méthode développée par Promega : HaloTag. Cependant je ne comprends pas bien son mode de fonctionnement.
J'aimerais savoir si quelqu'un connaît cette méthode et pourrait m'aider un peu à la comprendre ?
Merci beaucoup !
Bonjour,
Si j'ai bien compris la brochure, en gros au lieu d'avoir une GFP comme protéine de fusion, c'est le Halo tag qui est couplé à la protéine d'intérêt. Le principe a l'air assez simple, en gros on peut ensuite coupler n'importe quoi sur le Halo (billes, biotine, fluorophore...). Ce qui fait qu'on peut l'utiliser pour localiser la protéines d'intérêt dans un tissu ou une cellule avec la fluo, mais aussi coupler avec des billes pour faire un réaction biochimique, ou encore fixer la protéine sur une lame de verre, le tout sans devoir recommencer le clonage à chaque nouvelle application.
J'espère avoir été assez clair.
Merci beaucoup pour votre réponse.
D'accord, finalement, cette méthode n'apporte aucun avantage en plus par rapport au marquage au GFP non ?
Tout dépend de ce que tu comptes en faire. Si c'est uniquement pour faire un marquage GFP, c'est clairement pas rentable (j'imagine que le Halo n'est pas donné), si tu compte te servir de plusieurs applications, ça peut devenir super intéressant parce que tu ne devras pas recloner X fois ton gène d'intérêt dans un nouveau plasmide.
Ok merci encore pour votre réponse !
