Vecteur d'expression et enzymes de restriction

[invite8d27bda6]

Bonjour,

Je ne suis pas certaine d'avoir bien compris le recours aux enzymes de restriction dans la construction d'un vecteur .
En fait, cela permettrait d'incorporer le gène d'intérêt ainsi que son promoteur et son terminateur au sein du vecteur ?
Comment procède t'on exactement ? Grossièrement voilà ce que j'ai compris :
On utilise des enzymes de restrictions pour isoler le gène d'intérêt, son promoteur, etc... et en parallèle on a recours à d'autres enzymes de restriction pour couper le vecteur.
On commence par insérer le promoteur qu'on lie au vecteur grâce à une ligase (en supposant bien sûr que les deux extrémités soient compatibles), puis on insère le gène qu'on lie au promoteur et enfin on fait de même avec le terminateur ?
Je suis désolée si mes questions paraissent un peu simplistes, mais je préfère être sûre que je ne fais pas de fausses interprétations !
Voilà, merci d'avance
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[invite74b9e03b]

Bonsoir,

De manière général tout est inclut dans le vecteur: promoteur, terminateur, eventuels tag et MCS (sites de restriction) Il ne reste qu'à cloner l'ORF du gène qui vous interesse. Que vous aurez extrait avec des enzymes de restrictions et en parallèles vous ouvrirez le vecteur à l'aide des mêmes enzymes de restriction au niveau du MCS afin de générer des extrémitée compatible. Reste à insérer l'ORF dans le vecteur. Cependant il éxiste beaucoup de méthodes de clonage (gateway etc)

Camu