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Dosage spectro



  1. #1
    mihoby

    Dosage spectro


    ------

    Bonjour, je passais des échantillons pour analyser le coating HRP Streptavidine-Biotine (Biotine liée à de l'ADN) sous la spectrométrie à UV et j'ai des pics à 218nm (A=1,538) et à 277nm (0,006).
    Je ne sais pas comment interpréter cela.
    Les acides nucléiques absorbent spécifiquement à 260nm-280nm, mais c'est le fait d'avoir un pic à 218nm qui m'étonne et pourquoi est ce que l'absorbance est très faible à 277nm

    Pourriez m'aider svp? Merci

    -----

  2. #2
    nowell

    Re : Dosage spectro

    Bonjour,

    Tout d'abord, que cherchez vous comme pic ? l'activité de la pérox je présume.

    Cela dit : 218nm , ça peut peut être des cycles phénoliques ou la présence de carbohydrates. votre échantillon n'est probablement pas propre.
    Attention, les acides nucléiques, c'est 260nm, pas 260-280.
    280nm c'est pour les protéines.

    vos 0.006 à 277nm, c'est du bruit de fond, il n'y a rien.

    Cordialement
    Nowell
    Si les faits ne correspondent pas à la théorie, changez les faits. (A. Einstein)

  3. #3
    mihoby

    Re : Dosage spectro

    Bonjour, merci pour votre réponse. En effet ce que je recherche c'est l'activité de la HRP couplée avec la biotine. Je ne sais pas quelle peut être l'absorbance qu'on pourrait avoir (s'il y a une valeur de référence.....)
    Merci

  4. #4
    nowell

    Re : Dosage spectro

    Tout dépend du réactif que vous utilisez.
    Normalement, vous devriez vous situer entre 400 et 600 nm selon le réactif qui donnera alors un produit coloré.
    Mais, rassurez moi, vous savez quand même ce que vous utilisez comme composé ? savez quelle longueur d'onde vérifier ?

    Cordialement
    Nowell
    Si les faits ne correspondent pas à la théorie, changez les faits. (A. Einstein)

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