Bonjour, je prépare actuellement un exposé sur le séquençage de l'ADN notamment sur la méthode de Sanger.
Je pense l'avoir compris c'est juste que je ne comprend pas le fait que l'on puisse obtenir des brins de tailles différentes à la fin je ne comprend pas pourquoi la réaction ne s'arrête pas des le premier nucléotide spécifique du nucléotide marqué et faisant stopper la polymérase.
Merci d'avance pour votre aide
En fait il y a deux types de nucléotides dans la réaction. Les dNTP qui sont incorporés normalement par la polymerase et à partir desquels l'élongation peut continuer, et les ddNTP qui sont également incorporés par la polymerase mais étant deoxy en 3', la polymerase ne peut pas continuer l'élongation. Après, c'est une question de ratio entre ces deux types de nucleotides. A chaque nucleotide, la polymerase a beaucoup plus de chance de piocher un dNTP qu'un ddNTP puisque les premiers sont en excès par rapport aux seconds. Mais de temps en temps elle pioche le ddNTP et la réaction s'arrête.
Au final ce ratio en faveur des dNTP permet d'obtenir des acides nucléiques de toutes les longueurs et ainsi on peut retrouver la séquence de la matrice.
