Problème de repiquage

[invite37f52cd7]

Bonjour à tous,

Alors voilà, j'ai des bactéries stockées à 4°C (lactobacillus mucosae) dans une matrice de glycérol, je les repiques sur boite de pétri (milieu MRS) et je laisse incuber pendant 3 jours à 37°C, après les trois jours d'incubation je repique une colonie dans 5ml de MRS liquide et j'incube une nuit à 37°C et la le drame: rien ne pousse en milieu liquide. Ça marchais habituellement et soudainement impossible d'avoir une culture fraiche... Dois-je renouveler mon stock?

Merci a tous.
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[Flyingbike]

Vous cultivez en anaérobie ?

Sur boites, êtes vous sur que c'est du L mucosae ?

Vos MRS liquides et solides sont identiques (a part l'agarose) ?

Vous incubez vos boites et votre liquide au meme endroit ?

[invite37f52cd7]

Oui je cultive en anaérobie, oui je suis sur qu'il s'agit de L mucosae, oui mes milieux liquide et solide sont les mêmes et oui j'incube mes boites et mes liquides au même endroit. Une idée d'ou le problème pourrait venir ?

Merci d'avoir répondu!

[invite3f99c413]

Salut,
question peut-être stupide, mais comment est-ce que tu inocules ton milieu liquide?
Je demande ça car au labo on utilise de l'Anios pour désinfecter les paillasses/pipettes et autres.
Certaines personnes inoculent leur milieu liquide en prenant la colonie par l'intermédiaire d'un cône de micropipette et le "jette" dans le tube. Or desfois de l'anios mal essuyé sur la micropipette se retrouvent donc sur le cône, puis se dilue dans le milieu de culture, ce qui tuent les bactéries.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

Quels sont vos paramètres atmosphère ? c'est en jarre ou en chambre ?
Votre milieu est-il dégazé ? Vous le rentrez en avance en chambre ?

Vous avez essayé avec un nouveau milieu ? Est il prêt a l'emploi ? vous le complémentez ? (cysteine, glucose, etc.) ?


J'ai eu le problème avec un Bacteroides mais a l'inverse : pas de croissance sur boite mais en liquide oui.

Le pb était du a un catalyseur HS et un oxymètre menteur....