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Carte plasmide pcDNA 3.1



  1. #1
    Clemence-E

    Carte plasmide pcDNA 3.1

    Salut à tous
    Je revois ma copie d'examen de biologie moléculaire et j'essaye tant bien que mal de comprendre ce plasmide
    https://tools.thermofisher.com/conte.../pcdna3.1+.pdf
    La question était "expliquez les éléments du plasmide"
    J'ai mis :
    - pCMV promoteur pour initier transcription de la sq du gène CMV (prévenez moi si ça n'a aucun sens )
    - BGHpA sq de polyadénylation (pour installer queue polyA quand transcription d'un gène : mais quel gène ??? gène BGH, gène CMV ?)
    - Neomycin et ampicillin sont des cassettes de résistance

    Je sais que les "ori" servent à initier la réplication, mais je croyais qu'un plasmide se répliquait "d'un seul coup" et toujours à partir du même endroit, donc pourquoi il y a 3 ori différentes ? (SV40ori, pUCori, f1ori) Et SV40pA qu'est ce que c'est ?
    Merci pour vos réponses je suis totalement perdue

    -----


  2. #2
    Flyingbike

    Re : Carte plasmide pcDNA 3.1

    Attention.

    Le pCMV provient du CMV, mais il n'y a que le promoteur !!

    Ca sert a initier la transcription de ce qu'on met dans le MCS (la séquence d'intéret)

    Idem pour le signal de polyA, ça sert a polyadenyler le messager issu de la transcription de cette séquence

    le SV40ori permet la réplication du plasmide dans certaines cellules eucaryotes

    La cassette de sélection néo peut etre utilisée pour sélectionner des cellules eucaryotes, du coup pour que le messager fonctionne il faut qu'il soit polyadenylé (d'ou le sv40pA)
    La vie trouve toujours un chemin

  3. #3
    Clemence-E

    Re : Carte plasmide pcDNA 3.1

    Merci pour ta réponse.
    SV40ori sert d'origine de réplication dans certaines cellules eucaryotes, c'est-à-dire que si on l'insert dans E.coli il ne va pas s'exprimer ? Mais si le plasmide doit se répliquer dans une bactérie la réplication va commencer à pUCori ou f1ori ? Je ne comprends pas pourquoi il y a plusieurs origines...

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