Bonjour,
j'aurai quelques questions a poser j’espère avoir une réponse de votre part.
je suis en stage en M2, j'ai comme objectif de mesurer la variabilité de l'expression de certains gènes d’intérêt, pour cela j'ai dessiné des amorces qui ciblent ces gènes dans différentes espèces bactérienne. Je suis entrain de faire la validation des amorces j'ai donc fais une gamme étalon avec 5 différentes dilutions de mon échantillon ( facteur de dilution 2), et de différentes concentrations d'amorces dans le mélange réactionnel. j'ai eu du signal pour presque toutes les dilutions, les résultats de validation d'amorce que j'ai sont loin d’être satisfaisant du fait que les ct sortent de manière désordonné et très variable, c'est a dire vu que j'ai un facteur de dilution de 2 je devrais avoir deux ct de différence entre chaque dilution, et plus la concentration en ADN initiale est élevé plus le ct sort plus tôt. j'ai eu le contraire sur mes échantillons ( sur les faibles dilutions j'ai eu un ct faible, sur les grande un ct elevé), j'ai eu des je ne comprends rien a ces résultats , je me demande est cela est lié au inhibiteurs?
heeeeeeelp please
-----