Biochimie : purification d'enzyme

[invite8a35671b]

Bonjour,

Je suis complètement perdue pour un exercice. Le voici :

Une enzyme de poids moléculaire 24000 et de pI 5,5 est contaminée par deux protéines ; l’une
d’un poids moléculaire semblable mais avec un pI de 7,5 et l’autre avec un poids moléculaire de
100000 et un pI de 5,4. Proposer une stratégie de purification de l’enzyme. Justifier votre
réponse ?

Je ne sais pas quel direction prendre , si je dois faire le diagramme des pH (ce que j'ai fait pas je vois pas à quoi il pleut me servir), un calcul en particulier.

Je pense qu'en me donnant une première piste e pourrais déjà être débloquer.

Merci
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[invite2eb5a45f]

Ta protéine est contaminée par deux protéines : une ayant un pI identique à ta protéine, et l'autre ayant une taille identique à ta protéine. Tu ne peux donc pas uniquement séparer les protéines en fonction de leur taille, ni en fonction de leur pI. Mais peut-être qu'une succession des deux pour s'avérer payant...

[invite8a35671b]

Faudrait-il faire deux chromatographies en même temps ? ( d'exclusion diffusion et IEX) Mais est-ce possible ?

Merci

[invite2eb5a45f]

Je suis loin d'être un expert, mais je ne pense pas que ce soit possible. Il suffit de les faire l'une après l'autre.

[A voir en vidéo sur Futura]