Bonjour,
Je ne comprends pas la nécessité de mettre 2 amorces lors d'une PCR ?
Après un séquençage, les deux séquences obtenues sont représentées l'une en dessous de l'autre pour l'alignement avec une séquence de référence.
Comment est-ce que les séquences obtenues sens et anti-sens sont les mêmes ?
Une petite explication m'aiderait vraiment ...
Merci d'avance pour vos réponses.
prenons l'exemple ou initialement tu n'aurai qu'un seul morceau d'ADN avec ton gène, appellons "A" le brin sens et "B" le brin antisens, tu n'as donc qu'une seule fois A et une seul fois B dans ton mix (A et B sont hybridés)
Si tu ne mettait qu'une seule amorce, tu ne fabriquerait que des B, ouisque ton primer se fixe sur le brin A et par complémentarité il fera des brins "B", ducoup tu n'augmente jamais la quantité de brins "A" tu n'augmente que le complémentaire,
ducoup à chaque cycle tu ne fabrique qu'une seule copie
si tu as 2 brins au debut (A et B), au bout de 30 cycles tu as 32 brins (un couple AB complémentaires et 30 brins antisens solitaires)
en revanche si tu met une amorce sur A et une amorce sur B tu double ta quantité d'ADN a chaque cycle, et tu copie a la fois le brin sens et le brin antisens
au bout de 30 cycles puisque tu multiplie par 2 à chaque fois tu auras environ 2 milliards de brins (2^31), soit 1 milliard de couples AB double brins
lors du séquencage, si tu sequences dans les deux sens, tu auras la composition du brin sens (5'->3') et du brin antisens (5'->3'), et sur l'un des 2 le reverse complémentaire à été fait afin afin d'avoir 2x le brin sens et de comparer les deux séquences par un alignement classique
mais initialement sens et antisens ne sont pas les memes
Dernière modification par Loupsio ; 09/08/2017 à 10h39.
