Polymerase chain reaction

[Luka0208]

Bonsoir,
je me pose deux questions, merci de m aider

Tout d'abord, lorsque l ont effectue une PCR (polymerase chain reaction) a partir d un brin d adn, on dénature le brin et on l'hybride a deux amorces. l'amorce F va dans le sens et la R dans l antisens. Mais sur un brin d adn, qu est cr qui nous permet de savoir quel est le sens et l antisens

Aussi, j ai appris que la PCR en temps reel permet de quantifier precisement un fragment d adn d'interet present initiallement dans un echantillon, je ne comprend pas comment ? (Je comprends que cette technique permet de voir le nombre d'adn en temps reel mais comment obtenir la quantite initiale)

Merci bcp d'avance
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[Flyingbike]

il n'y a pas de sens et d'antisens à proprement parler, ça dépend du brin que l'on considère
Lorsqu'on amplifie un ADN monobrin, au premier cycle il n'y a qu'une seule amorce qui s'hybride !

Pour la qPCR, lorsqu'on est en phase d'amplification, c'est à dire avant de saturer le système, la quantité d'ADN néosynthétisée par la réaction est proportionnelle à la quantité initiale (plus il y en a au début, plus on en amplifie, plus on le détecte tôt)

[Luka0208]

D'accord merci bcp de votre reponse
Mais du coup si j'ai bien compris on ne parle d amorce R et F que pour un ADN monobrin ou un ARN (Dans ce cas il faut une transcription inverse)

[Flyingbike]

non, pour amplifier un fragment défini il faut deux amorces

Seulement, lorsque l'ADN est monobrin, le premier cycle ne fait intervenir qu'une des deux
Puis au second cycle la seconde amorce peut s'hybrider sur le brin synthétisé au premier cycle

[A voir en vidéo sur Futura]

[Luka0208]

Mais dans ce cas laquelle des amorces est la R et laquelle est la F