Bonjour à tous ,
Je suis perdu dans un certain exercice et je suis venue ici en espérant trouver des gens assez sympas pour m'aider à le résoudre
On nous demande d'expliquer l’intérêt de chaque étape de purification d'une protéine principalement détectée dans la fraction membranaire brute des cellules (probablement localisée dans les membranes lysosomales), et voici les étapes :
- Homogénéisation en présence d'un détergent (Triton X100 : détergent non ionique).
- Centrifugation et récupération du surnageant.
- Chromatographie sur diéthylaminoéthyl (DEAE)-Séphadex à pH 5 (tampon citrate de
sodium 0,01 M), élution par un gradient de force ionique (Figure 1a).
- Précipitation en milieu acide par dialyse contre un tampon citrate de sodium 0,02 M pH3
- Centrifugation, puis dialyse du surnageant contre un tampon phosphate 0,01 M pH 6,8.
- Chromatographie d'adsorption sur hydroxylapatite, élution par un gradient de force
ionique (Figure 1b).
- Dialyse contre un tampon phosphate 0,01 M pH 6,8.
- Chromatographie sur carboxyméthyl (CM)-Séphadex (même tampon).
- Récupération des fractions actives non retenues, et dialyse contre un tampon citrate de
sodium 0,01 M pH 5.
- Chromatographie sur Séphadex G-100 (même tampon)
voilà merci d'avance et pardonnez moi si c'était long
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