Bonjour à tous,

J'ai un exercice d'enzymologie qui me pose problème..

Le voici : " Une enzyme E, de masse moléculaire 120 kDa, exige pour être actif la présence d'un coenzyme,
le FMN. On réalise une expérience de dialyse à l'équilibre avec du FMN radioactif à 10^9 cpm par
millimole. Lorsqu'on mesure, une fois l'équilibre atteint, la radioactivité à l'extérieur et à l'intérieur
du compartiment de dialyse contenant la protéine à 0,12 mg/ml, on trouve :
à l'extérieur : 525 / 1315 / 3025 / 7800 cpm/ml
à l'intérieur : 735 / 1710 / 3630 / 8580 cpm/ml

Q1. quelle est la constante de dissociation (Kd) du complexe entre l'enzyme et le FMN ?
Q2. combien y a-t-il de sites de fixation (n) du FMN par molécule d'enzyme ? "

Tout d'abord, j'ai compris qu'à l'extérieur était le FMN libre et à l'intérieur le total.
J'ai alors calculé le FMN lié : total - libre donc intérieur - extérieur = 210 / 395 / 605 / 780 cpm/ml

Puis, j'ai divisé chaque valeur par 10^9 afin d'avoir des mmol/ml. Cela me donne FMN lié = 2,10.10^-7 / 3,95.10^-7 / 6,05.10^-7 / 7,8.10^-7 mmol/ml.

Afin de trouver Kd et n, je dois établir la courbe de Scatchard nu/[FMN]libre = f(nu).

Je sais aussi que nu = [FMN]lié / [E]total.

Mais là je bloque, je prend quoi en [E]total ?

Je vous remercie, par avance, de l'aide que vous pourrez m'apporter !