Bonsoir,
J'ai un problème assez bizarre. Lors de mon western blot, juste avant d'arrêter la migration, j'ai remarqué que mon marqueur de poids moléculaire ne s'était pas séparé et était resté entier, par contre il a bien migré jusqu'en bas du gel, de même pour les échantillons.
Cela fait donc penser à un problème dans la composition du tampon d'électrophorèse ou du gel de concentration et/ou séparation mais je suis sûr de leur préparation. Je n'ai pas inversé non plus les gels.
La seule chose qui a changé par rapport à d'habitude c'est que j'ai préparé le gel la veille et je l'ai enroulé dans du sopalin humidifié + du film et je l'ai laissé à 4°C (sans le peigne des puits). Cela a déjà été fait par d'autres personnes et ça marchait...
Du coup je ne comprends pas d'où peut venir l'erreur.
Il faut savoir que j'ai poursuivi jusqu'à la révélation et j'ai obtenu des bandes blanches sur une membrane noire (l'inverse de ce qu'on devrait avoir en gros) et les bandes blanches étaient tout en bas de la membrane, rien ne s'est séparé en fonction du poids moléculaire et tout est au même endroit, je pense que la bande blanche est due à ça : signal trop fort car tout au même endroit.
La coloration au rouge ponceau de la membrane a également montré que toutes les protéines étaient en bas.
Je ne sais pas si vous avez déjà eu ça ou une idée.
Merci.
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