Densité Optique a quoi sa sert en biologie ?

[invite70745b44]

Bonjour/Bonsoir,

J'ai 1 questions que je trouve assez ridicule mais bon. A quoi sert la DO (Densité Optique) en Biologie par exemple prenons mon cas dans l'étude d'ARNm par électrophorèse sur gel d'agarose ? merci pour vos futures réponses.
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[invite70745b44]

Par exemple si ma D.O est élevé cela signifie que la solution n'a pas absorbé la lumière ?

[Matdu17]

Non la DO correspond à l'absorbance de ta solution, plus elle est élevée plus ta solution absorbe la longueur d'onde pour laquelle tu la mesures.
Les acides nucéiques absorbent la lumière à 260nm de longueur d'onde (UV). Mesurer l'absorbance à 260nm d'une solution d'ADN ou d'ARN te permet donc d'en déduire la concentration en l'un ou l'autre (loi de Beer-Lambert).
Les mesures de DO sont aussi utilisées en biologie pour mesurer des concentrations de protéines, suivre des réactions enzymatiques ou encore des croissances bactériennes ou de levures en milieu liquide par exemple, le tout étant de savoir quelle longueur d'onde regarder pour tel ou tel contexte.

[invite3a3d529a]

Bonjour,

En fait, le terme densité optique est l'ancienne appellation de l'absorbance, mais tout le monde en labo parle de DO
Comme dit précédemment, il faut régler le spectrophotomètre sur 260 nm (longueur d'onde émise) pour faire une mesure d'absorbance d'acides nucléiques. Pour mesurer un taux de protéine, le pic d'absorption se situe à 280 nm.

Cas concret : en thèse, je produisais une protéine recombinante qui a la capacité de se lier aux ARNt. A la fin de ma première étape de purification (une colonne Ni-NTA), mes échantillons absorbaient principalement à 260 nm, preuve que ma protéine était très liée à des acides nucléiques (= les ARNt). Après la deuxième colonne de purification, mes échantillons absorbaient à 280 nm : preuve que je m'étais débarrassée des ARNt.

Dalmia

[A voir en vidéo sur Futura]