Ligation ratio insert vecteur

[invite8573ad8c]

Bonjour,

je bute sur une question: le ration insert - vecteur doit être de 5:1
dans mon énoncé:
je dois mettre dans mon mélange
- 100ng de vecteur avec une concentration de 25ng/μL (donc 4μL)
- Le produit d'amplification (de 240pb) estimé à 10ng/μL, en excès 5 fois par rapport au vecteur
- le reste du mélange (tampon, ligase)

Je ne comprends pas comment sans connaître le nombre de vecteur et d'insert pour le poids respectifs je peux en déduire la quantité d'insert à mettre pour 100ng de vecteur

Merci d'avance pour votre aide!!
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[invite8573ad8c]

Pour ceux qui un jour retombent sur ce problème:
http://www.ens-lyon.fr/RELIE/PCR/res...gfp/Ssclon.htm

((ng de vecteur * taille en kb de l'insert) * 3/1) / taille en kb du vecteur = ng d'insert

[Flyingbike]

attention le ratio dans la formule n'est pas pour 5:1 !

merci d'avoir partagé le lien en tout cas, la question revient souvent

[invite8573ad8c]

Oui, petite erreur, appliquez votre ratio:


((ng de vecteur * taille en kb de l'insert) * RATIO) / taille en kb du vecteur = ng d'insert

[A voir en vidéo sur Futura]