Science de laboratoire-Calcul de concentration pour AntagomiR (in vivo)

[Shirley6]

Bonjour à tous,

Dans le cadre de mon étude je suis amené utilisé un AntagomiR pour injection in vivo chez le model murin.
Je ne suis pas du tout à l´aise avec ce genre de calcul.
Je m´explique:
- Basé sur la littérature scientifique, je souhaiterai injecter 10mg/kg et 45mg/kg d´un AntagomiR.
- Les informations dont j´ai a ma porté sur cette antagomiR sont:
--> Mw. calc (Da): 5015
--> Amount (nmol): 8067 nmol
--> Amount (mg): 40.458 mg
L´antagomiR est sous forme lyophilisé. Je dois par conséquent le centrifuger pour pouvoir ensuite suspendre le contenue avec de l´H2O stérile (ou autre composant).

Le souci est que je n´ai aucune idée comment procédé dans mes calculs pour (1) suspendre avec une concentration convenable mon AntagomiR lyophilisé et (2) comment re-dilué ma solution stock pour obtenir 10mg/kg et 45mg/kg.

Cela serait génial que vous puissiez m´expliquer clairement comment faire et quels sont les étapes á suivre de sorte que je puisse comprendre la méthode!

Merci de votre compréhension!
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[Flyingbike]

Pas de miracle, voici un exemple :

Il faut déjà définir le volume injectable, et ça c'est fonction de la voie, de la fréquence et de la physiologie de l'animal. Cela définit un maximum.
Techniquement, il faut aussi définir un minimum car il est par exemple compliqué d'injecter précisément 2µL en IV.


Si vous passez par exemple 100µL en IP, il faudra que dans ces 100µL vous ayez l'équivalent de 10mg/kg, soit pour une bestiole de disons 20g (ou 0.02kg), 10mg x 0.02 = 0,2mg.
Ces 0,2mg devront être contenus dans les 100µL, ce qui fait une concentration de 0,2/0.1 soit 2mg/mL.

Aucun calcul compliqué, il faut juste se poser un peu !

[Shirley6]

L´exemple est très clair et bien expliqué.
Cependant, mon antagomiR est sous forme lyophilisé ce qui signifie que je dois re-suspendre le contenue au préalable.
Tout en gardant une concentration qui me permettra d´utiliser différente concentration pour mes injections IV.

[Flyingbike]

L´exemple est très clair et bien expliqué.
Cependant, mon antagomiR est sous forme lyophilisé ce qui signifie que je dois re-suspendre le contenue au préalable.
Tout en gardant une concentration qui me permettra d´utiliser différente concentration pour mes injections IV.

Oui, mais vous pouviez poursuivre. Dans mon exemple j'arrive à une concentration de 2mg/mL (pour avoir 10mg/kg en injectant 100µL à une souris de 20g).

Ça fait que à partir de 40.458mg, vous devrez reprendre dans 40.458/2 soit 20.2mL.


Encore une fois ce n'est qu'un exemple, il faut que vous déterminiez la fourchette de volume que vous pouvez injecter, il faut aussi que vous décidiez si pour vos deux doses, vous allez préparer deux dilutions différentes ou bien une seule et ajuster le volume, etc.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Shirley6]

Ok, je vois. Voici comment je vois les choses...

Ce que je veux: Préparer une solution stock de cet AntagomiR de telle sorte à avoir 200mg/kg (dans 100ul)
200 mg x 0,02 = 4 mg
4 mg/0,1=40 mg/ml => 40,458 mg/40 mg = 1,011 ml => ce qui voudrait dire que je dois suspendre mon contenue lyophilisé avec 1ml d´H2O.
Ceci serait pour préparer ma solution stock de 200mg/kg.

Maintenant, je veux avoir 2 différentes doses:
10 mg/kg => 50 ul (solution stock) + 950 ul H2O => cela représenterai 10 injections de 100 ul chacune (pour une souris de 20g).
45 mg/kg => 225 ul (solution stock) + 775 ul H2O => cela représenterai 10 injections de 100 ul chacune (pour une souris de 20g).

Est-ce que mes calculs sont juste ou complètement à coté de la plaque

Aussi, comment faire si certaines souris pèsent 17g ou 25g au lieu de 20g??

[Flyingbike]

Ok, je vois. Voici comment je vois les choses...

Ce que je veux: Préparer une solution stock de cet AntagomiR de telle sorte à avoir 200mg/kg (dans 100ul)
200 mg x 0,02 = 4 mg
4 mg/0,1=40 mg/ml => 40,458 mg/40 mg = 1,011 ml => ce qui voudrait dire que je dois suspendre mon contenue lyophilisé avec 1ml d´H2O.
Ceci serait pour préparer ma solution stock de 200mg/kg.

Maintenant, je veux avoir 2 différentes doses:
10 mg/kg => 50 ul (solution stock) + 950 ul H2O => cela représenterai 10 injections de 100 ul chacune (pour une souris de 20g).
45 mg/kg => 225 ul (solution stock) + 775 ul H2O => cela représenterai 10 injections de 100 ul chacune (pour une souris de 20g).

Est-ce que mes calculs sont juste ou complètement à coté de la plaque

Aussi, comment faire si certaines souris pèsent 17g ou 25g au lieu de 20g??

Bonjour

Les calculs sont corrects !

Pour la dernière question, c'est vous qui décidez, en fonction de la précision requise, de la variabilité des poids des animaux.....
Idéalement parlant, il faut peser l'animal avant l'injection et ajuster le volume. Pour faire plus simple, vous pouvez préparer une table qui donne la correspondance poids/volume à injecter, sur la base de 100µL par 20g