Cytométrie de Flux
Bonjour à tous !
Je travaille actuellement sur une expérience portant sur l'effet d'un nouveau médicament sur deux types cellulaires. Jusqu'à présent, je pensais bien comprendre les résultats, mais un gros doute vient de surgir… Je réalise que quelque chose m'échappe.
Voici la situation :
Les cellules ont été incubées avec de l’iodure de propidium (PI) et de l’annexine V.
L’annexine V se lie aux phosphatidylsérines, qui se retrouvent à la surface lors de l’apoptose précoce — c’est donc un marqueur d’apoptose.
Cependant, ces mêmes phosphatidylsérines deviennent également accessibles en cas de nécrose, lorsque la membrane plasmique est détruite.
L’iodure de propidium, lui, pénètre uniquement dans les cellules dont la membrane est endommagée. Comme les cellules n'ont pas été perméabilisées, l’IP ne marque que celles en apoptose tardive ou en nécrose.
J'ai donc cette image :
TEST.PNG
A l'aide de mes cours, j'ai eu cette réflexion :
Annexin V-/PI- = cellules vivantes (non apoptotiques)
Annexin V+/PI- = apoptose précoce
Annexin V+/PI+ = apoptose tardive + cellules nécrotiques
Annexin V-/PI+ = rare, peut signaler des nécroses
Et c’est là que ça coince. Je constate visiblement un grand nombre de cellules CFPAC-1 Annexin V- / PI+ lorsqu'on augmente les concentrations de médicament, ce qui est normalement peu fréquent… Et surtout, impossible de distinguer clairement entre apoptose tardive et nécrose dans la population Annexin V+ / PI+, ce qui brouille l’interprétation des résultats.
J'ai également ce Western Blot à disposition, si cela peut aider... : TEST2.PNG
Quelqu'un pourrait-il me débloquer s'il-vous-plaît? Cela serait super !
Merci Beaucoup !!
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