Ligne de base en LC/UV

[invitecc9a6978]

Bonjour,

Ceci est mon premier post. Vous pourrez peut être m'aider ?

Actuellement, j'utilise une méthode isocratique (EAU/ACETONITRILE) sur une chaîne LC/UV. Celle ci est équipée d'un dégazeur, et d'une pompe quaternaire.

Au cours de mes runs, j'ai parfois un décrochage de ma ligne de base à un moment aléatoire. La ligne de base monte (ou descend) de qq unités, puis se stabilise là où elle est. Ceci m'empèche d'utiliser la chaîne correctement, car j'ai une déviation du temps de rétention, de l'aire ou de la hauteur du pic de la molécule qui m'intéresse.

Je suis la pression, et celle ci reste constante malgré ce "décrochage".

J'ai pensé à la lampe UV (mais je crois que si elle était usée, la ligne de base dériverait en continue, ou le signal serait de plus en plus faible, non ?). J'ai déjà changé des filtres de la pompe quaternaire.

Si vous avez des idées pour résoudre ce problème, à vos claviers !
Merci
-----

[inviteb7fede84]

Bonjour,

A vérifier déjà si ce phénomène apparait lors de l'utilisation d'autres colonnes...

[invitecc9a6978]

Bonjour,

Merci Shaddock pour votre réponse. Le décrochage est net, comme ceci :
........................ ______________
_____________/

Je n'ai pas pensé à la colonne, je vais tester.

Je suis à l'écoute de toute suggestion.

[inviteb7fede84]

Ou une microbulle coincée dans la cellule ???

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitecc9a6978]

Je refais une maintenance sur la pompe, et je vais vérifier la cellule. Je vais faire des tests complémentaires pour déterminer la cause exacte de mon problème. Je vais bientôt recevoir une nouvelle lampe UV ce qui me permettra également de voir si le problème vient de la ou non.

Merci pour les réponses
N'hésitez pas à me donner d'autres pistes...

[invite9b06c290]

Ou une microbulle coincée dans la cellule ???

Phénomène rare en isocratique !

La bulle semble le plus probable, mais ca n'explique pas la déviation du temps de rétention.

A priori les pompes ne prennent pas d'air sinon la pression fluctuerait.

Les soupcons sont clairement sur le détecteur !

[inviteb7fede84]

"Les soupcons sont clairement sur le détecteur !"

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Cela n'expliquerait pas la dérive du temps de rétention ? Je reviens à ma première idée, la colonne (?)!

Difficile de se prononcer à distance ...

[invitecc9a6978]

Effectivement, tout cela est difficile à comprendre, j'espère trouver la solution rapidement !

J'ai fait d'autres tests aujourd'hui, pour le moins surprenant, après une maintenance de la pompe : sans aucun débit de liquide (sur plusieurs heures), la ligne de base est tantôt stable, tantôt fluctuante (comme s'il y avait des bulles !)... La lampe UV arrivera bientôt, j'en saurais donc plus.
Bon wek end !

[inviteb7fede84]

Il arrive aussi qu'une lampe UV un peu "pompée" produise des variations d'intensité lumineuse. C'est toujours le dernier endroit suspecté (compte tenu du prix des lampes)...Cela n'explque pas les variations de temps de rétention !

[invite1bb98b4a]

Hello boss!
dis moi, utilises-tu la chambre de mélange du système pour faire ton éluant ou bien le prépares-tu avant? Perso avec les mélanges d'éluant, je préfère les réaliser au préalable, l'homogénéité du mélange est alors bien meilleure. Bon ce qui m'étonne par contre c'est que la pression reste constante...
Fais un run sans colonne autrement et vois ce que ça donne pour voir si ça ne vient pas de là.
Autre chose, c'est tout à fait normal qu'à débit nul tu aies une variation de l'intensité. Ce qui passe dans le faisceau de la lampe n'est pas statique, et tu as nécessairement à un moment ou à un autre des hétérogénéités de composition.
Enfin, vois aussi du côté des miroirs du détecteur qui peuvent être encrassés. Par contre ça c'est la galère parce que niveau sous ça douille à nettoyer...
Bon voilou pas d'autres idées, bon courage!

[invite4644b058]

slt moi aussi j travaille avec une hplc et tu as l'air de t'y connaitre.Le solvant est de l'HNO3 dilué et j'utilise un révélateur pour détecter des sulfates via un détecteur uv!!mais j'obtiens des pics négatifs??est ce normal et que puis je faire

[inviteb8631b66]

salut as tu pensé a une installation électrique un peu vieillote? en effet parfois le simple fait d'éteindre une lumière peut produire des variations sur ton chromato.

[invitecc9a6978]

Hello boss!
dis moi, utilises-tu la chambre de mélange du système pour faire ton éluant ou bien le prépares-tu avant? Perso avec les mélanges d'éluant, je préfère les réaliser au préalable, l'homogénéité du mélange est alors bien meilleure. Bon ce qui m'étonne par contre c'est que la pression reste constante...
Fais un run sans colonne autrement et vois ce que ça donne pour voir si ça ne vient pas de là.
Autre chose, c'est tout à fait normal qu'à débit nul tu aies une variation de l'intensité. Ce qui passe dans le faisceau de la lampe n'est pas statique, et tu as nécessairement à un moment ou à un autre des hétérogénéités de composition.
Enfin, vois aussi du côté des miroirs du détecteur qui peuvent être encrassés. Par contre ça c'est la galère parce que niveau sous ça douille à nettoyer...
Bon voilou pas d'autres idées, bon courage!

Merci pour les réponses.
Je vais changer la lampe dès que je la recevrais, je verrais par la suite. Je ne connais pas l'historique de cette LC/UV, elle a voyagé, venue des USA depuis 2003, pas très utilisée dans le labo où je suis, et la lampe n'a jamais été changée... Heureusement que j'ai une autre chaine LC/UV. J'aimerais faire tourner les 2 chaines LC/UV en même temps. Je vous tiens au courant dès que j'ai fais les tests.

[invitecc9a6978]

slt moi aussi j travaille avec une hplc et tu as l'air de t'y connaitre.Le solvant est de l'HNO3 dilué et j'utilise un révélateur pour détecter des sulfates via un détecteur uv!!mais j'obtiens des pics négatifs??est ce normal et que puis je faire

Quelle est la longueur d'onde utilisée ?

[invitecc9a6978]

salut as tu pensé a une installation électrique un peu vieillote? en effet parfois le simple fait d'éteindre une lumière peut produire des variations sur ton chromato.

Effectivement, je vais voir si il y aurai un ondulateur.... d'après ce qu'on m'a dit, ca peut venir aussi de là.

[invite015c3a14]

Bonjour,
J'ai des micro bulles coicées dans ma cellule HPLC mais je ne sais pas d'ou elles viennent ni comment m'en débarraser. Une petite idée??? Merci d'avance