Peut-on utiliser des sels comme standards internes par LC/MS?
Ex. Codeine-glucuronide.TFA-D3 dosé à 1 mg/ml par LC/MS. Faut-il le dérivatiser ou bien peut-on l'utiliser tel quel?
Merci por votre réponse
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Peut-on utiliser des sels comme standards internes par LC/MS?
Ex. Codeine-glucuronide.TFA-D3 dosé à 1 mg/ml par LC/MS. Faut-il le dérivatiser ou bien peut-on l'utiliser tel quel?
Merci por votre réponse
Bonjour,
On peut. Pour ce qui est de ton exemple, il faut savoir qu'en phase gaz les pKa n'ont rien à voir avec ceux en phase condensée: en l'occurence ta codéine-glucuronide ammonium rendra son proton à l'anion trifluoroacétate et tu ne verras que la base libre en masse. Mais si ça te pose un problème de conscience, et si tu en as la possibilité, tu peux mettre une base dans ton éluant HPLC, de l'ammoniaque par exemple...
Seulement il y a un hic: il me paraît clair que ce que tu veux injecter en LC/MS c'est la solution de ton précieux métabolite de la codéine dans l'acide trifluoroacétique deutéré que tu as utilisée pour faire ta RMN. Or l'unique hydrogène de l'acide trifluoroacétique est facilement échangeable et là tu as fait une solution diluée de ton métabolite dans CF3CO2D. Donc au moins tous les protons facilement échangeables de ton métabolite ont étés échangés par du deutérium, ici en l'occurence tous les protons des groupements OH. A supposer que la conjugaison de la codéine avec l'acide glucuronique se fasse par son unique groupement hydroxyle, tu auras "seulement" tous les protons des OH du reste glucuronique remplacés par du deutérium... Ben c'est pas grave: il suffit que ton solvant HPLC contienne un solvant à hydrogène facilement échangeable (eau, alcool, acide carboxylique, ammoniac, amine,...) pour que tout rentre dans l'ordre.
Pas grave sauf... si tu as laissé traîner longtemps ta solution dans le TFA, qui est est un acide quand même assez fort, auquel cas il y a pu y avoir des échanges proton-deutérium lents et là tu es purement et simplement foutu... Masse inexploitable.
Pour te donner un exemple qui te fera mieux comprendre: si tu mets du benzène ordinaire dans un solution suffisamment concentrée d'acide sulfurique deutéré dans l'eau deutérée, lentement mais sûrement et pourvu que la solution acide soit en excès, les six protons du benzène seront échangés un à un par du deutérium...
Bien à toi.
Précision quand même: pas d'effet attendu de la deutération sur les temps d'élution en HPLC.Bonjour,
On peut. Pour ce qui est de ton exemple, il faut savoir qu'en phase gaz les pKa n'ont rien à voir avec ceux en phase condensée: en l'occurence ta codéine-glucuronide ammonium rendra son proton à l'anion trifluoroacétate et tu ne verras que la base libre en masse. Mais si ça te pose un problème de conscience, et si tu en as la possibilité, tu peux mettre une base dans ton éluant HPLC, de l'ammoniaque par exemple...
Seulement il y a un hic: il me paraît clair que ce que tu veux injecter en LC/MS c'est la solution de ton précieux métabolite de la codéine dans l'acide trifluoroacétique deutéré que tu as utilisée pour faire ta RMN. Or l'unique hydrogène de l'acide trifluoroacétique est facilement échangeable et là tu as fait une solution diluée de ton métabolite dans CF3CO2D. Donc au moins tous les protons facilement échangeables de ton métabolite ont étés échangés par du deutérium, ici en l'occurence tous les protons des groupements OH. A supposer que la conjugaison de la codéine avec l'acide glucuronique se fasse par son unique groupement hydroxyle, tu auras "seulement" tous les protons des OH du reste glucuronique remplacés par du deutérium... Ben c'est pas grave: il suffit que ton solvant HPLC contienne un solvant à hydrogène facilement échangeable (eau, alcool, acide carboxylique, ammoniac, amine,...) pour que tout rentre dans l'ordre.
Pas grave sauf... si tu as laissé traîner longtemps ta solution dans le TFA, qui est est un acide quand même assez fort, auquel cas il y a pu y avoir des échanges proton-deutérium lents et là tu es purement et simplement foutu... Masse inexploitable.
Pour te donner un exemple qui te fera mieux comprendre: si tu mets du benzène ordinaire dans un solution suffisamment concentrée d'acide sulfurique deutéré dans l'eau deutérée, lentement mais sûrement et pourvu que la solution acide soit en excès, les six protons du benzène seront échangés un à un par du deutérium...
Bien à toi.
Merci pour ta réponse très détaillée. En fait après relecture de mon énoncé j'aurais dû écrire Codeine-6-glucuronide-D3.TFA. Le goupement N-methyl de la codéine est deutéré et non pas le TFA. Est-ce que celà peut poser un problème en LC/MS?
3 unités de masse de plus en MS sur le pic de masse et tous les fragments, sauf évidemment pour celui (ou ceux) qui a perdu le groupement méthyle en question.